稳定表达人TMPRSS2蛋白质悬浮生长MDCK细胞系的构建.pdfVIP

江苏农业学报(JiangsuJ.of Agr.Sci. ),2015,31(5):1084 ~1090 1084 http:/ / 冯摇 磊,吴培培,褚摇 轩,等. 稳定表达人TMPRSS2蛋白质悬浮生长MDCK细胞系的构建[J].江苏农业学报,2015,31(5):1084鄄1090. doi:10.3969/ j.issn.1000鄄4440.2015.05.022 稳定表达人TMPRSS2 蛋白质悬浮生长MDCK细胞系 的构建 冯摇 磊,摇 吴培培,摇 褚摇 轩,摇 陈摇 丽,摇 王伟峰,摇 侯继波 (江苏省农业科学院/ 国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏 南京 210014) 摇 摇 摘要:摇 为了构建能稳定表达人域型跨膜型丝氨酸蛋白酶(TMPRSS2)的重组MDCK细胞,并考察该重组细胞株对禽 流感H9亚型病毒的增殖能力,采用基因工程的方法,将 TMPRSS2 基因克隆入真核表达载体中获得重组表达载体 pIRES鄄TMPRSS2。 采用25000线性PEI进行悬浮生长MDCK细胞的转染操作,经两轮G418抗性筛选获得能够稳定表达 该蛋白质的重组MDCK鄄Sus鄄TMPRSS2细胞。 RT鄄PCR、Westernblot 以及间接免疫荧光检测(IFA)的结果显示,TMPRSS2 已 -1 在该重组细胞株中正常表达。 该重组细胞的悬浮比生长速率达到0郾438 d ;在3 L反应器中,最大细胞密度可达到1ml 6 6.83伊10 个。 在对6株禽流感H9亚型病毒的连续盲传试验中,经MDCK鄄Sus鄄TMPRSS2细胞盲传的子代病毒可以获得较 高的血凝效价和半数组织感染滴度。 关键词:摇 MDCK细胞; 稳定转染; 跨膜型丝氨酸蛋白酶; 禽流感病毒 + 中图分类号:摇 Q813.1 1摇 摇 摇 文献标识码:摇 A摇 摇 摇 文章编号:摇 1000鄄4440(2015)05鄄1084鄄07 Establishment of suspension鄄cultured MDCK cell line expressing type II transmembrane serine protease(TMPRSS2) FENG Lei,摇 WU Pei鄄pei,摇 CHU Xuan,摇 CHEN Li,摇 WANG Wei鄄feng,摇 HOUJi鄄bo (JiangsuAcademy of Agricultural Sciences/ NationalResearch Center of Engineering and Technologyfor Veterinary Biologicals,Nanjing210014,China) 摇 摇 Abstract:摇 To establish recombinant MDCKcellsexpressingtypeIItransmembrane serineprotease(TMPRSS2)andto investigatethe influenceof the MDCKcellsonthereplicationof avianinfluenzavirus,thegeneof TMPRSS2 wasclonedinto the eukaryotic expression vector to generate recombinant pIRES鄄TMPRSS2. The recombinant plasmid was transfected into MDCK鄄Sus cellsby linear25000polyethyleneimine (PEI)bymeansof single鄄cell suspensionculture. Therecombinant MD鄄 CK鄄Sus鄄TMPRSS2 cell clonewas achieved by two rounds of