广州管圆线虫对淡水螺感染性的实验研究.docxVIP

广州管圆线虫对淡水螺感染性的实验研究 中国田螺网报道 近年來，广州管鬪线虫病的感染呈上升趋势。自2006年6刀北京友谊医院 收治全市首例广州管圆线虫病患者以来,已确诊广州管圆线虫病的患者增至70余人,其中绝 大多数患者都是因食用了凉拌福寿螺而发病的。福寿螺是广州管圆线虫的主要中间宿主z—, 随着人们饮食习惯的改变，广州管圆线虫病对人类的致病机会不容忽视。 随着气候变暧和气象界常事件的频繁发生，专家预测螺类传播媒介的自下而上生存范围可能 扩大，这对寄生虫病的发生、发展有重要影响。口 19X6年福寿螺(Pomaceacanaliculata)首次被 证明是广州管圆线虫(Angiostrongyluscantonensis)的适宜中间宿主以后，日本、中国台湾地区、 小国人陆等地相继发牛了 H然感染的福寿螺，并成为屮国人陆广州管圆线虫病传播的最主要 的屮间宿主Z—°但是,广州管圆线虫的屮间宿主多达50余种，国内市场上常见的褐云玛瑙螺 (Achatinafulica)N中国圆田螺(Cipangopaludinachinensis)等食用淡水螺也被证明口J以自然感染 广州管圆线虫。为了掌握这些食用淡水螺的潜在传播危险性,我们对3种食川淡水螺与广州 管圆线虫的相容性进行了实验研究。 I材料与方法 1.1材料 1」」中间宿主福寿螺冲国圆山螺于2006年9月采自深圳龙岗癸涌地区,褐云玛瑙螺于2006 年9刀采自深圳市南山区植物园，三种螺均在实验室繁殖后代，实验室繁殖的后代无广州管圆 线虫感染，以此作为广州管圆线虫攻击感染的实验材料。 1.1.2广州管圆线虫I期幼虫广州管圆线虫模型动物购自中山大学基础医学院奇生虫学教研 室，模型动物的建立首先将口然感染广州管圆线虫的褐云玛瑙螺(2006年7刀采口深圳市南山 区),将其压碎、去壳、组织匀浆后,按照消化法，置丁?人工消化液(0.2%胃蛋白酶,0.7%HCI)37°C 2h,解剖镜下分离广州管圆线虫III期幼虫。収80条活跃幼虫灌胃感染SD大鼠,6周后，毎隔12h 收集1次24h内的粪便,将所有粪便浸泡在去氮水中，过滤、淘洗5?6次，每次静直15?30min 麻倾除上清液，用去氯水稀样沉渣，配制I期幼虫混悬液，备用。 1.2方法 1.2.1人工感染螺将3科喋分別置于有充气泵和滤水器的恒温(24±2)°C玻璃缸(59cmX55cm X33cm)中饲养1周，待其生存状态稳定后进行感染。将过渡、淘洗后的广州管闘线虫【期幼 虫混合液搅匀，分成2份,每份含I期幼虫约150000条，分别倒人2个感染缸内，加水至深1cm。 随机収3种螺各50只，混匀，随机放入2个感染缸内使其感染。分别于感染后2、4、8、12 及24h从2个感染缸中随机取3种螺各20只，清水洗净，另外取未感染的3种螺各20只作为 阴性对照。 122饲养収感染不同时间后的3种螺各20只常规饲养在带充气泵和滤水器的玻璃缸中，并统 计2周内死亡情况。 1.2.3解剖感染螺饲养2周示解剖，在解剖镜(NikonJJ木)及显微镜(Nikon,I I木)下检杏螺体感 染情况。将螺压碎、去壳、称重，明碎软体,置绞碎机进一步粉碎，然后倒入量杯，加入人工消化 液(按“2g胃蛋白酶/1000ml及0.7%HCI”配制)，于37°C消化2h。检杳螺体内幼虫。 1.2.4观察指标包括实验螺数、已感染螺数、死亡螺数、检岀幼虫数、各螺的重量等。统计 死亡率、感染率、感染度和虫密度。 死亡率=死亡螺数/实验感染螺总数； 感染率二被感染螺数/实验感染螺总数； 感染度即为虫负荷,是每一 ?螺体内幼虫的绝对数量； 虫密度=虫负荷/螺重量。 1.2.5统计与分析采用SPSS 11.0软件统计分析螺死亡率、感染度、感染率,用Logistic回归分 析死亡率、感染率与螺的种类及感染时间札I关性，用箱式图(屮位数、四分位数、最人值、最 小值)描术3种螺的虫负荷与虫密度随感染时间的变化，用Kruskal-Wallis法检验同种螺的虫 负荷和虫密度少感染吋间的关系，检验相同感染吋间组3种螺的虫负荷和虫密度的差界，如差 异显著，则进一步对各观察值取秩次并通过方差分析法进行两两比较。 2结果 2.1三种螺死亡情况 感染后2周内3种螺的死亡数相似，福寿螺占.35%(8/20).中国圆出螺山45%(9/20)、褐云玛 瑙螺占35%(8/20)o死亡高峰为感染第1周,占总死亡数的41%(22/60),第8天后死亡率明显 降低。通过Logistic回归分析结果表明，死广率与螺的种类无相关性(表1)。 1 三种不同淡水螺在不同感染时间的死亡率 Tab. 1 The death rate of different fresh water snail on different time 感染时间(ID褐云玛瑙螺 死亡