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微生物原生质体育种的方法 1.微生物原生质体再生育种 2.微生物原生质体诱变育种 3.微生物原生质体转化育种 4.微生物原生质体融合育种 5.其他微生物原生质体育种 2.温度：20~30℃，时间1min~1h。 3.亲株的亲和力和原生质体的活力 4.无机离子： Ca2＋， Mg2＋促进融合； 5.其他条件：细胞密度要在107~109个/mL。 四、融合体再生 （一）融合体再生 双亲融合后形成的融合体不等于重组体，以霉菌来说，可能是异核体或杂合二倍体或者重组体。 融合体的再生，包括融合体细胞壁合成、重建、融合体的再生。 融合原生质体再生的方法： 1、 酵母、细菌：双层平板法 2、放线菌、霉菌：双层平板法，也可以直接分离到高渗培养基平板上。 （二）融合体的检出与分离 1、营养缺陷型标记：双亲带有不同营养缺陷型标记。 2、抗药性：双亲具有不同的抗药性。 3、灭活原生质体：融合前杀死一亲本。 4、荧光染色法：双亲用不用的荧光色素染色标记。 5、双亲对碳源利用不同：要结合其他特性。 6、其他 五、融合重组体检出 （一）重组体的检出和鉴别的方法 1. 直接法 2. 间接选择法 3. 钝化选择法 指用灭活原生质体和具有活性的原生质体融合，灭活的原生质体和营养缺陷型菌株原生质体在基本培养基上都不能生长，只