植物石蜡切片技术.ppt

植物石蜡切片技术植物教研室 一、材料的选择 1选择植物的哪一部分。 2选择有代表性的材料。 3在选择植物器官时，首先确定利用何种切面。 二、固定 杀死：指用一种或多种化学药品，迅速地终结生物组织的生命。这就要求杀死剂要有强的渗透力，快的渗透速度。 固定：在杀死的基础上，把组织或细胞按生活状态固定下来，使其在制片的过程中都不发生任何变化。 保存：材料经杀死、固定后，需要把组织或细胞的结构长久保存下来，不致于发生溶解等现象。 ＊常用的固定液： 　福尔马林－醋酸－酒精固定液（FAA）： 　　F－福尔马林：………5ml 　　A－冰醋酸：……….. 5ml 　　A－酒精:…………… 90ml ＊细嫩材料用50%的酒精，一般材料用70%酒精。 ＊适用范围：一般的根、茎、叶、花药、脂肪等切片。 ＊固定时间：2－24小时即可，亦可作长久保存。 三、冲洗 ＆所谓冲洗，就是用洗涤剂把材料中的固定液洗去，以便进行染色。 ＆ 老材料、茎、根等用50%的酒精洗三次，最少1小时，每次最少10分钟，细嫩材料必须用水洗，洗三次，共2小时，每次最少20分钟，间隔时间可以不等。　 四、染色 细嫩材料（茎尖、根尖、幼叶初生结构）必须用苏木精染色（苏木精对酒精处理过的材料不染色）。用酒精洗的可用番红染色。 苏木精染色12－24小时；番红染色最少24小时，可以延长。 五、脱水 ＆目的： （1）完全除去材料中的水分，使其它药品能渗透到材料中去。 （2）使材料变硬，切片时不变形。 ＆程序： 50%　　 　60% 　　　70% 　　 80% 　 85% 　　　 90% 　　　95% 100% 100%　 　　　　　　　 六、透明 ＆目的：1、除去材料中的脱水剂，便于封藏。 　　　　2、增加组织中的折光率，便于在显微　　　　　镜下观察。 　　　　3、使包埋剂容易渗入植物组织中，便　　　于包埋及切片。 ＆程序：　?酒精＋ ?二甲苯 纯二　　　 甲苯 七、浸蜡 用道生液（dowson’s solution)浸蜡，其配方如下： 　　 石蜡………….. .1份 　　 二甲苯………. ..2份 　　 纯酒精…………3份 程序：1、材料放入道生液后，加塞45°C下24h。 　　　2、去塞：24h温度慢慢升高，最后达56°C 　　　3、经三级纯蜡杯，每次0.5-1h。 八、包埋 ＆包埋：用石蜡将材料包埋于叠好的纸盒中。 ＆方法：见演示。 ＆分割蜡块、粘蜡块：略 九、切片 把木块固定于切片机的夹物部，使材料的切面与刀口平行，材料的纵轴与刀口垂直。 调整切片机的厚度，切片时左手握毛笔，右手摇切片机，材料便以连续的蜡带出现，等到达到一定的长度后，放入蜡盒中。 十、粘片、展片及烘干 ＆滴一滴蛋白甘油于载玻片上，用净小指涂匀。 ＆将蜡带放入45oC的水中展片，然后把材料粘于载玻片上。 ＆将载片放于36oC－40oC的烘箱中烘干，约一天即可。也可烤干。 十二、脱蜡 在染色缸内进行，需经过二甲苯15min,二甲苯25min 。 十三、脱水、染色及透明 滴注纯酒精、95%酒精各4－5秒，苯胺固绿染色约1－2分钟，再滴注95%酒精、纯酒精、1/2纯酒精＋1/2二甲苯，各约4－5秒，再经一次二甲苯，最后置二甲苯缸中透明约5分钟。 　　十四、封片、贴标签： 加拿大树胶封固后贴标签。 * 2h 2h 2h 2h 2h 2h 2h 1h 1h 2－6h 2－6h *