几丁质酶产生菌筛选鉴定及产酶性能研究.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，３０（８）：８２８７ 几丁质酶产生菌筛选鉴定及产酶性能研究 张海涛　王　婷　田　囡　刘新利 （山东轻工业学院山东省微生物工程重点实验室　济南　２５０３５３） 摘要　从土壤样品中筛选得到一株高产几丁质酶菌株Ｃ６５２，经形态学观察和 １８ＳｒＤＮＡ序列测 定，鉴定为Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｕｍｉｇａｔｕｓ，对产酶培养基进行初步优化，测得最高酶活可达６．９Ｕ／ｍｌ，酶活 力较优化之前提高了２１０％。酶学性质研究表明该几丁质酶分子量约为２０ｋＤａ，酶在６０℃下保温 ２＋ ２＋ ５０ｍｉｎ酶活降为０，最适酶反应温度是５５℃，酶反应最适ｐＨ为７．０，Ｍｇ ，Ｃｕ 对酶反应有促进 ３＋ 作用，Ｆｅ 对酶反应有抑制作用。 关键词　几丁质　几丁质酶　烟曲霉　产酶特征 中图分类号　Ｑ９３３ 　　几丁质（Ｃｈｉｔｉｎ）又称甲壳素、甲壳质，是以 １，４ 高氏一号培养基。几丁质酶筛选培养基（胶体几丁质 β Ｎ乙酰氨基葡萄糖为基本单位的直链多聚物，其含量 培养基）：胶体几丁质 １．５％，ＫＨＰＯ０．１％，酵母粉 ２ ４ 居天然聚合物第二位，每年生物合成量约为 １００亿 ０．３％，琼脂 １．５％，（ＮＨ）ＳＯ０．１％，ＭｇＳＯ ·５ＨＯ ４ ２ ４ ４ ２ ［１］ 吨 。几丁质的降解产物几丁寡糖、壳低聚糖和Ｎ乙 ０．０３％，ｐＨ７．０。 酰氨基葡萄糖具有抗菌、抗肿瘤等活性，因而具有广泛 　　胶体几丁质制备：将５ｇ细粉几丁质溶于８８ｍｌ浓 ［２３］ 的应用前景 。利用化学方法对几丁质进行降解，其 盐酸中，此几丁质成胶状，在４℃放置２４ｈ。然后用玻 工艺过程中产生大量的酸碱废液，不仅会对环境造成 璃纤维过滤到５００ｍｌ去离子水中，同时搅拌，离心，将 较大的污染，而且工艺过程较难控制高分子聚合物降 其洗至中性，最后加适量去离子水高压灭菌后保存。 解的程度，造成产物混杂，产物生物学活性难以保证。 　　种子培养基：葡萄糖０．２％，蛋白胨０．５％，酵母膏 生物酶法降解利用甲壳素生物质资源是人类目前在新 ０．２％，ＫＨＰＯ０．０７％，ＫＨＰＯ０．０３％，ＮａＣｌ０．０５％， ２ ４ ２ ４ 材料、新医药等领域的研究热点之一。 ＭｇＳＯ ·７ＨＯ０．０５％，ｐＨ７．０。 ４ ２ 　　尽管已有文献报道，产生几丁质酶的微生物种类 　　发酵培养基：ＮＨＮＯ０．０５％，ＮａＣｌ０．０５％， ４ ３ 很多，许多细菌、真菌还有放线菌均可以产生几丁质 ＫＨＰＯ０．０５％，ＭｇＳＯ ·７ＨＯ０．０５％，ＦｅＳＯ ·７ＨＯ ２ ４ ４ ２ ４ ２ 酶，其中芽孢杆菌（ Ｂａｃｉｌｌｕｓ）是一类重要的几丁质酶生