1.2.3CCK-8法测定不同处理因素对SKBR-3细胞生长增殖的影响.docVIP

雌激素激活GPER-EGFR-ERK通路促进人乳腺癌SKBR-3细胞增殖[基金项目]：国家自然科学基金面上项目；国家自然科学基金 [基金项目]：国家自然科学基金面上项目；国家自然科学基金面上项目 [通讯作者]：涂刚，电话：02389011191，Email：tugang68@126.com 李维东1，罗浩军，李挣华，余腾华，杨光伦，涂 刚1（400016，重庆，重庆医科大学附属第一医院内分泌乳腺外科） [摘要] 目的 探讨G蛋白偶联雌激素受体（G protein-coupled estrogen receptor,GPER）介导雌激素对人乳癌细胞SKBR-3增殖的影响。 方法 RT-PCR鉴定SKBR-3人乳癌细胞内GPER的表达，激光共聚焦显微镜扫描检测钙离子探针标记的细胞内钙离子浓度随时间的变化，CCK-8法观察测量细胞的增殖生长，流式细胞术检测细胞周期，Western blot 检测磷酸化细胞外信号调节激酶（Phospho-extracellular signal-regulated kinase，p-ERK）的相对表达量。 结果 SKBR-3细胞在mRNA水平表达GPER，而ERα、ERβ均为阴性。E2刺激SKBR-3细胞，细胞内钙离子浓度在数十秒内迅速升高，细胞增殖显著增加，流式细胞术检测细胞S期及G2-M期