53实验一生物组织中可溶性还原糖脂肪蛋白质的鉴定.docVIP

　　实验一 生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定 　　●教学目标 　　知识目标 　　识记：记住鉴定所用材料，懂得选材的要求。 　　理解：理解实验的目的、原理和方法步骤，进一步归纳出生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质的鉴定原理。 　　能力目标 　　1.学会制备生物组织试样，并能按规范化要求操作，独立完成鉴定工作。 　　2.能正确选取鉴定试剂，并能进行规范化操作。 　　3.明确观察对象，正确说出鉴定过程中试样的颜色变化，并能用准确的语言解释实验现象，作出结论；填写实验报告册。 　　4.能熟练使用低倍镜、制作徒手切片、临时装片，了解规范使用高倍镜的方法。 　　情感目标 　　培养科学思维能力和科学研究方法。 　　●重点·落实方案 　　重点 　　掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。 　　落实方案 　　教师可事先配制好已知待测样品，如葡萄液、植物油滴、鸡蛋蛋白稀释液。让学生按要求加入相应试剂，观察颜色变化，从而让学生自己归纳出本实验的简单原理。 　　●难点·突破策略 　　难点 　　实验内容较多，实验时间长，必须周密安排，才能按时完成。 　　突破策略 　　学生要分工合作。 ● 实验要求 1、按学号坐定，不再换位，不准走动，小声交流，教师讲课时不准操作、不准交谈。 2、仪器摆放整齐，试验前先检查仪器，破损自负，试验结束刷洗干净，恢复原样，以备后用。椅子放回。 3、按组轮流做卫生，课代表负责，转天交报告，打铃下课。 4、取量小，节约，而且现象明显。 　　●实验原理 　　1.可溶性还原糖鉴定原理 　　生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗糖分子内没有，为非还原糖。实验中所用的斐林试剂，只能鉴定生物组织中可溶性还原糖，而不能鉴定可溶性非还原糖。 　　斐林试剂为一定浓度的氢氧化钠和硫酸铜配制而成的淡蓝色Cu (OH) 2沉淀的悬浊液，葡萄糖溶液在加入斐林试剂后，在加热条件下还原为砖红色的沉淀，而葡萄糖氧化成葡萄糖酸。其反应式为： 　　CH2OH－（CHOH）4－CHO＋2Cu（OH）2 CH2OH－（CHOH）4－COOH＋Cu2O＋2H2O 　　用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液变化过程为：浅蓝色 棕色 砖红色沉淀 　　2.脂肪鉴定原理 　　苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ为一种橙黄色脂肪染色剂，苏丹Ⅲ染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色，苏丹Ⅳ染液遇脂肪的颜色反应为红色。 　　3.蛋白质鉴定原理 　　将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲。 　　 　　双缩脲在碱性环境中能和硫酸铜结合成红紫色的络化物。蛋白质分子中含有的肽链与双缩脲结构相似，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应。 　　●材料用具 　　实验材料：葡萄糖液、苹果组织液，植物油滴、浸泡过的花生种子或新鲜的花生种子，鸡蛋蛋白稀释液、黄豆组织液。 　　仪器：徒手切片刀，试管架，试管夹，大小烧杯，小量筒，滴管，酒精灯，三脚架，石棉网，火柴，载玻片，盖玻片，毛笔，吸水纸，显微镜。 　　试剂：斐林试剂，苏丹Ⅲ染液或苏丹Ⅳ染液，双缩脲试剂，体积分数为50%的酒精溶液，蒸馏水。 　　●实验指导 　　生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定实验，实际上是三个独立的实验。在实验中，如注意以下问题，效果则更好。 　　1.在做可溶性还原糖的鉴定实验中，一是选材最好是白色或近于白色的植物组织，这样可以避免材料自身颜色对实验变化颜色的掩盖。经实验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。二是斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后方可使用，切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中。 　　2.在做脂肪的鉴定实验中，切取花生子叶薄片，要求实验技能较高，不妨改成刮取花生子叶泥制作临时装片，易做，效果又好。 　　3.在做糖和蛋白质的实验时，鉴定之前需要留出一部分样液，以便与鉴定后的样液的颜色做比较，这样可增强说服力。 　　●课时安排 　　1课时 　　●教学过程 　　一、操作要点及注意事项 　　1.往试管加入试剂时，要使试管稍倾斜，用滴管沿管壁缓慢加入试剂。 　　2.注意斐林试剂必须混合试剂A和B后方可使用，而双缩脲试剂使用时是先加入试剂A，摇匀后观察颜色变化，再加入试剂B，再观察颜色变化。 　　3.鉴定可溶性糖，加热试管时，应该用试管夹夹住试管上部，放入盛开水的大烧杯加热；注意试管底部不接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以提起试管夹，使试管与沸水接触面减少，以免溶液溢出。 　　二、方法步骤 　　教师把事先配制好已知待测样品，葡萄糖液、植物油滴、鸡蛋蛋白稀释液让学生按要求加入相应试剂，观察颜色变化。