毕业论文--荧光原位杂交技术(FISH)及其在植物分子细胞遗传学中的应用与展望.docVIP

甘蔗糖业 Sugarcane and Canesugar TITLE 荧光原位杂交技术(FISH)及其在植物分子细胞遗传学中的应用与展望 NUMPAGES 荧光原位杂交技术(FISH)及其在植物分子细胞遗传学中的应用与展望 摘 要：荧光原位杂交是在分子水平上检测外源染色质的一种有效方法。该技术在研究植物分子细胞遗传学、基因扩增、基因作图及植物进化和亲缘关系的鉴定上已广泛应用。本文简要介绍了荧光原位杂交探针类型、探针标记方法和染色体制片技术等，概述了荧光原位杂交技术在构建植物基因组物理图谱，功能基因定位，远缘杂种的鉴定及外源染色质的检测，减数分裂时期染色体行为研究和探讨种的起源中的应用与展望。 关键词：荧光原位杂交技术；外源染色质的检测；染色体行为；种的起源 中图分类号：MACROBUTTON NoMacro S566.1 文献标识码：a 文章编号：1005-9695 Applications and Prospects of Fluorescence in situ Hybridization on Plant Molecular Cytogenetics Abstract: Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a most effective method of detecting alien chromatin at molecular level. It plays an increasing important role in a variety of research fields, such as plant molecular cytogenetics, gene amplification, gene mapping, evolution and identification of the relation ships of different species. In this paper, the probes used in this technique, probes label methods and chromosome preparation were introduced. The application of FISH in plant genomic physical atlas estimation, functional gene location, for distant hybrid identification and alien chromatin detection, analysis of chromosome behavior in meiosis, origination of species are summarized and prospected. Keywords: Fluorescence in situ hybridization(FISH); Exoqenous chromatin detection; Chromosomes behaviour; origin of species. 1 荧光原位杂交技术介绍 荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization, FISH)始于20世纪70年代[1]，其原理是：DNA或RNA序列首先被报告分子(Reporter molecules)标记，通过原位杂交使荧光分子沉积在特定DNA序列位点的染色质上，在探针杂交位点便可见不连续的荧光信号。该技术的应用扩展了生物学研究的领域。荧光原位杂交广泛被运用，主要是由于以下几方面的原因：①FISH的灵敏度接近同位素标记探针杂交[2-3]，在安全性，空间分辨率，速度和探针的稳定性等比放射性同位素标记探针杂交更具优越性；②运用不同荧光色素标记的探针可同时检测一个细胞核中2种或更多的核甘酸序列；③DNA序列能被定位在目标范围从载玻片上分散的中期细胞染色体到悬浮固定保存细胞三维结构的间期核中[4]；④探针标记和荧光试剂从商业上可得，而且使FISH过程直接可靠；⑤荧光显微镜和数字成像系统在过去20多年中不断改进；⑥特殊种属的全基因组，完整染色体，染色体亚区域或单拷贝序列能在多种探针混合运用情况下出现特异信号；⑦未标记的基因组DNA 通过探针预杂交抑制重复序列，对定位象柯斯质粒这样一类含大插入探针的特定序列是至关重要的。 随着FISH技术的不断发展，衍生了染色体原位抑制(CISS)技术、间期核FISH、引物原位标记或DNA合成(PRINS)技术等，并且发展出M-FISH、3D-FISH、Rx-FISH技术、CGH以及近年来微阵列技术(Microarray)等。同时，