睾酮定量分析酶联免疫检测试剂盒1简介2检测原理细胞冻存液.pdf

睾酮定量分析酶联免疫 检测试剂盒 使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整, 本试剂盒仅供科研使用。如有产品包装破损或质量投拆，请在收到货一个月之 内联系我们。 1.简介 睾酮（17 Hydroxy-4-Androstene-3-on）是C19 类固醇激素，分子量288，是哺乳动物最重要的雄性激素之一。雄性体内的睾酮主要 由睾丸合成；雌性由卵巢和肾皮质合成。在血浆中的睾酮由β 球蛋白负责运输，称为性激素结合球蛋白（SHBG）。在循环系统中，有多达 98%的睾酮以结合形式存在，游离睾酮在靶组织中，通过酶降解形成具有生理学活性的二氢睾酮。 睾酮与雄性第二性征的产生有关，测定其浓度对判断性腺发育不全很有意义。在雌性，睾酮水平增高多见于多毛症，在人类女性中， 睾酮水平增高表现女性男性化，多囊卵巢，卵巢癌，肾上腺肿瘤和肾上腺增生。在人类男性中，睾酮水平增高与下丘脑垂体病变，睾丸肿 瘤，先天性肾上腺增生和前列腺癌有关。 低睾酮水平可见于下列疾病：垂体功能减退、先天性睾丸发育不全、睾丸女性化、睾丸切除术、隐睾病、酶缺陷和一些自身免疫性疾 病。 2.检测原理 睾酮试剂盒采用竞争法检测原理。在酶标板预包被了高特异性识别睾酮的抗体，同时加入样本和HRP 连接的睾酮结合物，样本中睾酮 与睾酮结合物竞争性结合酶标板中包被的抗体。洗去游离的未结合的睾酮与睾酮结合物，加入TMB 底物，与抗体结合的睾酮结合物上带的 HRP 就会催化底物TMB 反应，颜色显蓝色，中止后显黄色。如果样本中睾酮含量越多，则与包被的抗体结合的睾酮结合物则越少，颜色则 越浅，即颜色与样本中的浓度成反比。 本试剂盒主要用于定量检测哺乳动物血清、血浆及细胞上清中的睾酮含量 3.试剂盒组成 3.1、预包被板 12条/6条(96T/48T)； 3.2、标准品6管，每管0.5ml (96T/48T),浓度如下表： Standard A B C D E F ng/ml 0.5 1 2 4 8 16 3.3、样本稀释液，1瓶16ml/8ml (96T/48T)； 标准曲线中0 浓度标准品以样本稀释液直接加入。 3.4、睾酮冻干酶，2 瓶/1 瓶(96T/48T) 3.5、TMB 底物溶液，1 瓶10ml/5ml(96T/48T)； 3.6、中止液，1 瓶5ml； 3.7、浓缩洗涤液（20×），1 瓶30ml/15ml(96T/48T)； 3.8、封板纸3 张/2 张(96T/48T)； 3.9、打印版半对数坐标纸一张 3.10、说明书一份； 4、检测中需要但没有提供而需要自备的材料： 4.1、振荡混匀器。 上海传秋生物科技有限公司 4.2、可控温水浴箱 37℃。 4.3、ELISA 酶标仪（450nm）。 4.4、移液枪头等 5、注意事项 5.1、未开封的试剂应保存在2－8℃。包装箔袋开封后，应立即封紧。开封后的包被微孔板储存在2－8℃下可以稳定6 个星期。 5.2、所有试剂和所需微孔板条在使用前应平衡至室温 （25~28℃）。 5.3、使用前将浓缩洗涤液用蒸馏水按1：20 稀释（例如：10ml 浓缩洗涤液应用蒸馏水稀释至终体积200ml）。 5.4、稀释后的洗涤液在2－8℃下可以保存4 个星期。 5.5、样本收集 血清和EDTA 处理的血浆样本。避免使用明显溶血、黄疸、脂血样本。使用的血清和EDTA 血浆样本，按常规方法制备。样品在2－8℃下保 存不超过24 小时。如果样品需要长期存放（3 个月以上），应冻存在－20℃。使用过程中应避免反复冻融。 5.6、如果样本中的睾酮含量高于16ng/ml，应将样本用试剂盒提供的零浓度样本稀释液稀释后再进行检测。 5.7、一些影响代谢的药物及含有5-羟色胺(血管收缩素)和其它生物胺相对含量较高的饮食也会影响检测的结果。 6.检测过程 所有的试剂和样本在使用前应平衡至室温并摇匀（摇匀过程应保证无泡沫产生）。一旦检测开始，应连续操作，不中断。开始分析前，推 荐准备好所有试剂，打开瓶盖，将所需微孔板条固定等等，以防止实验中出现不必要的时间拖延。使用每种试剂、标准品或样品时，都应 更换一次性移液枪头，以免交叉污染。 7.检测步骤 7.1、将所需微孔板条在微孔架上固定； 7.2、移取25