紫外分光光度法测定核苷酸含量.pptVIP

实验二：核酸的紫外扫描及含量测定 实验目的 1.了解紫外分光光度计的基本原理并掌握其使用方法。 2.掌握使用紫外分光光度法测定核酸含量的原理和方法。 实验原理 ??? 核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键，具有紫外吸收。RNA和DNA的紫外吸收峰为260nm。一般在260 nm波长下，每毫升含1mg DNA溶液的光吸收值约为0.020，每毫升含1mgRNA溶液的光吸收值为0.022。故测定待测浓度RNA或DNA溶液260nm的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便，迅速。若样品内混杂有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质，则测定误差较大，故应设法事先除去。纯净的RNA溶液，其A260/A280≥2；纯净的DNA溶液，其A260/A280≥1.8。 ?? 实验原理 如果已知待测的核酸样品不含酸溶性核苷酸或可透析的低聚多核苷酸，即可将样品配制成一定浓度的溶液(20～50mg/mL)，在紫外分光光度计上直接测定。 ??? 蛋白质由于含有芳香氨基酸，因此也能吸收紫外光。通常蛋白质的吸收高峰在280nm处，在260nm处的吸收值仅为核酸的十分之一或更低，故核酸样品中蛋白质含量较低时对核酸的紫外测定影响不大。 ??? RNA在260nm与280nm处的吸收比值在2.0以上，DNA的比值则在1.9左右。当样品中蛋白质含量较高时，比值即下降。 实验器材 操作指南： 1.