注射用盐酸胺碘酮细菌内毒素检查法研究.docVIP

PAGE PAGE 1 注射用盐酸胺碘酮细菌内毒素检查法研究 　　[摘要]目的建立注射用盐酸胺碘酮细菌内毒素检测法。方法按照《中华人民共和国药典》2010年版（二部）附录ⅪE细菌内毒素检查法，对3批样品进行干扰试验和细菌内毒素检查。结果将样品浓度稀释到0.125mg/mL时，不干扰细菌内毒素试验，其细菌内毒素限值定为1.000EU/mg。结论细菌内毒素检查法用于注射用盐酸胺碘酮热原的检查，方法适用、可靠。 　　[关键词]注射用盐酸胺碘酮；细菌内毒素；干扰试验；热原 　　[中图分类号]R927[文献标识码]A[文章编号]1674-4721（2013）03（b）-0072-03 　　注射用盐酸胺碘酮属为抗心绞痛药，能选择性扩张冠状动脉血流量，同时减少心肌耗氧量，减慢心率，降低房室传导速度，与β-受体阻滞剂的效应相似。用于室上性和室性心动过速、阵发性心房扑动和颤动、预激综合征，也可用于顽固性阵发性心动过速、慢性冠状动脉功能不全及心绞痛等[1-2]。当不宜口服给药时应用本品治疗严重的心律失常，尤其适用于下列情况：房性心律失常伴快速室性心律、W-P-W综合征的心动过速和严重的室性心律失常[3]。本文根据《中华人民共和国药典》（简称《中国药典》）2010年版二部附录ⅪE“细菌内毒素检查法”中所述的药品细菌内毒素的检查方法及其干扰试验的基本原理，对注射用盐酸胺碘酮的细菌内毒素检查进行了研究[4]。本文列出了相同厂家3个不同批次的样品在不同厂家鲎试剂（TAL）下的干扰试验数据，阐明了对注射用盐酸胺碘酮进行细菌内毒素检查的可行性，进一步建立了细菌内毒素检查方法。现报道如下： 　　1仪器与试剂 　　1.1仪器 　　旋涡振荡器（IKA-MS-1）；恒温水浴箱（德国Julabo19A）。 　　1.2试剂 　　细菌内毒素检查用鲎试剂（灵敏度：0.125EU/mL；规格：0.1mL/支；批号：1011181）、BET水（批号：1101040；规格：5.0mL/支），购于广东湛江安度斯生物有限公司。细菌内毒素检查用鲎试剂（灵敏度：0.125EU/mL；规格：0.1mL/支；批号：1102130）购于广东湛江博康海洋生物有限公司。细菌内毒素标准品（批号：150601-201174；效价：160EU/支）购自中国食品药品检定研究院。 　　2实验方法及结果 　　2.1鲎试剂灵敏度（λ）的复核 　　上述两个批号鲎试剂（1011181、1102130）经由细菌内毒素标准品（150601-201174）标定，结果均在0.5～2.0λb（标准灵敏度）之间，符合《中国药典》的相关规定，可用于试验。 　　2.2样品细菌内毒素限值（L）的确定 　　细菌内毒素限值L=K/M[3]，式中K为成人每千克体重每小时最大可接受的细菌内毒素剂量，《中国药典》规定注射剂K=5EU/（kg?h）；M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，人均体重按60kg计算，按照注射用盐酸胺碘酮说明书的用法与用量，本品成人一日总量1200mg，4h内滴注完毕，L=K/M=5EU/（kg?h）/1200mg×60kg×4h=1.0EU/mg[5]。 　　2.3最小有效稀释浓度（MVC）的确定 　　限值L为1.000EU/mg时，根据公式MVC=λ/L，当选用鲎试剂灵敏度为λ=0.125EU/mL时，供试品溶液中盐酸胺碘酮的最大有效稀释倍数为MVC=λ/L=0.125mg/mL。 　　2.4样品干扰预实验 　　采用灵敏度为0.125EU/mL的细菌内毒素检查鲎试剂，对批号为100601的供试品进行稀释检验，分别稀释为浓度0.500、0.250、0.125、0.060mg/mL。具体过程如下：取本品1瓶（0.15g/瓶）加BET水稀释至30.0mL（稀释浓度为5.000mg/mL），取浓度为5.000mg/mL的稀释液1.0mL加BET水至10.0mL（浓度为0.500mg/mL），取浓度为0.500mg/mL的稀释液5.0mL加BET水至10.0mL（浓度为0.250mg/mL），取浓度为0.250mg/mL的稀释液5.0mL加BET水至10.0mL（浓度为0.125mg/mL），取浓度为0.125mg/mL的稀释液5.0mL加BET水至10.0mL（浓度为0.060mg/mL）[6]。试验中另设阳性对照（PC）和阴性对照（NC），每个浓度设2管平行管，结果详见表1。 　　由表1可以判断当盐酸胺碘酮浓度为0.500mg/mL时，供试品有增强TAL与细菌内毒素之间凝集反应的作用，稀释至浓度0.250mg/mL时，干扰现象消除。可以选择灵敏度λ为0.125EU/mL的TAL，稀释样品至0.125mg/mL进行干扰确证试验。 　　2.5供试品干扰试验 　　取1个厂家的3批注射用盐酸胺碘酮，用BET水进行稀释