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小麦矮缩病毒引起的植株矮化与赤霉素 代谢的相关性分析 吴慧娟刘艳王锡锋 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学 国家重点实验室 摘要： 【目的】由异沙叶蝉(Psammotettix alienus)传播的小麦矮缩病毒病是近年来 中国西北部麦区严重发牛的小麦病毒病害之一。受侵染的小麦植株严重矮化，有 效分簾减少，产量损失严重。论文旨在明确小麦矮缩病毒(Wheat dwarf virus, WDV)侵染小麦植株后矮化症状形成与赤霉素代谢调控的关系，为该病害的防治 打下基础。【方法】以小麦甜种扬麦12为试验材料，以异沙叶蝉为传毒介体饲 毒后转移到1叶期的健康幼苗(3头/株)上进行传毒，同时以无毒异沙叶蝉取 食健康幼苗为对照。根据试验需要，不同时间取样备用。为保证试验的准确性， 经PCR检测为阳性的作为处理组试验材料;采用间接酶联免疫吸附(ELISA)法， 利用植物赤霉素(GA3)试剂盒测定分析侵染第21天取样的小麦叶片赤霉素含 量;将带毒条沙叶蝉接种的小麦苗分为两个平行处理组，接种后第7天分别用 GA3 (浓度为50 mg - L-1)和H20进行叶面喷施处理，每隔一周处理一次。以无 毒叶蝉接种后长势一致的小麦苗作为对照组，根据株高统计结果分析外施赤霉 素对受侵染小麦植株的表型变化;以山羊草(Aeg订ops tauschi i)的内根-贝壳 杉烯合成酶(ent-kaurene synthase-like 3, KSL3)的基因编码区序列为参考 基因设计引物 (KSL3-F:5, -ATGATGGTGAATCCGCCGC-37 ;KSL3-R:5Z -TTAATGGTTGATCTTTGTTT-3 ),对扬麦12的KSL3进行克隆和序列分析;分别取接种后7、14和21 d的小 麦植株叶片，提取RM后反转录，以克隆得到的Ta KSL3基因序列设计引物(Ta KSL3-F:5, -GAGACATGTGCCATGGCGTTC-3 ;Ta KSL3-R:5, -CGTGTCACTCAGATCGGTGGAG-3),选择小麦翻译延伸因子 1A (EF-1 a )作为内参基因，利用荧光定量PCR方法分析赤霉素代谢相关基因的转 录水平。【结果】经ELISA检测发现，接种21 d的发病植株赤霉素含量与健康 植株相比降低了 2 9%;通过施用浓度为50 mg ? L-1的赤霉素后，发病植株的平 均株高相比对照组显著増加35. 9%;采用同源克隆得到了完整的小麦赤霉素合成 途径关键酶KSL3的编码区序列，长度为1 827 bp,编码608个氨基酸，BLAST 比对分析发现该DNA序列与山羊草KSL3编码区序列相似度为85. 2%。经荧光定 量检测发现受小麦矮缩病毒侵染后小麦KSL3表达量显著下降，接种14 d降低为 对照组的35. 7%, 21 d降低为对照组的9.6%。【结论】小麦矮缩病毒的侵染导 致赤霉素合成途径关键酶的表达量降低，可能使赤霉素合成受阻，赤霉素含量 降低引发受赤霉素调节的细胞生物学过程异常，从而诱导矮化症状形成。研究结 果为揭示小麦矮缩病毒侵染的致病机理和病害防控打下了基础。 关键词： 小麦矮缩病毒;矮化;赤霉素;内根-贝売杉烯合成酶;致病机理; 作者简介：吴慧娟，E-mail:wuhuijuanl2345@163. com。 作者简介：刘艳，E-ina订:yliu@ippcaas. cn 收稿日期：2017-03-06 基金：国家公益性行业(农业)科研专项(201303021) Correiational Analyses Between Dwarfing of Plant Height Induced by Wheat dwarf virus (WDV) Infection and Gibberellin Metabolism WU Hu订uan LIU Yan WANG XiFeng State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences; Abstract： [Objective】 In recent years, wheat dwarf virus disease transmitted by 1eafhopper (Psammotettix alienus) is becoming one of the severe virus disease on triticcac crops in the northwest of China. Infcctcd plants may be severely