细胞培养体外培养基本方式及过程.pptVIP

二、体外培养的基本方法和过程 （2）分离（散）细胞培养物： 对于贴壁依赖型细胞来讲，随着培养时间的延长，细胞分裂增殖，数量愈来愈大，逐渐会在培养瓶皿的底壁形成一完整的细胞层，细胞之间因接触性抑制作用而停止生长，此时便需要进行传代。 判断分离（散）细胞培养物是否需要传代的主要指标就是观察培养物是否已基本长满培养瓶皿的底壁。 1、原代培养物需要传代的指标 （二）继代培养（secondary culture） 二、体外培养的基本方法和过程 （3）悬浮培养物： 悬浮培养细胞之间虽然不容易发生接触性抑制现象，但随着培养液中细胞数量的增加，细胞的生存空间会越来越小，营养供应愈趋紧张，代谢产物积聚，培养环境逐渐不适应细胞的生长，因而需要传代。 1、原代培养物需要传代的指标 （二）继代培养（secondary culture） 1、原代培养物需要传代的指标 2、传代的过程 3、传代培养的注意事项 二、体外培养的基本方法和过程 （二）继代培养（secondary culture） 二、体外培养的基本方法和过程 2、传代的过程 （1）分离（散）细胞培养物 ： （贴壁依赖型细胞） 1）弃去原培养液（吸出或倾倒） ； 2）漂洗：1~2次， 3）离解细胞： 4）终止消化： 5）吹打分离细胞： 6）离心： 7）重新悬浮、计数： 8）分装： 9）送培养箱继续培养。 （二）继代培养（secondary cultu