现代分子生物学创新技术基础第五章.ppt

4 ）通过胚胎干细胞转染制备转基因鼠 小鼠胚胎干（ES）细胞来自于交配后3.5-4.5天的胚胎，并产生于囊胚的内细胞团。 ES细胞可在体外培养并很容易转染。 转染方法：电击法、逆转录病毒载体法、脂质体包 装法等将目的基因的表达载体转染ES细胞。 转染后的ES细胞注射到一个宿主囊胚中，并将其再 植入假孕母鼠体内，该胚胎将发育成嵌合体。其生 殖系可能整合了外源基因，经适当交配可获得纯合 转基因小鼠． 5） 体细胞核移植技术 将体细胞核植入去核的卵细胞中，体细胞核被卵细胞重新程序化，无论供体细胞的分化状态如何，使其能够重新演绎发育的整个过程。 通常所说的动物克隆指体细胞克隆，即动物的无性繁殖。 英国科学家Wilmut等于1997年首次报道应用体细胞核移植技术生产出遐迩闻名的多利羊 若供体细胞核是经过转染而添加了转基因，将其移植到去核卵后发育而成的动物就将是转基因动物。 第一次证实这种设想的是Schnieke et al. 他用人的凝血因子IX基因转染培养的羊成纤维细胞，生产一个克隆的转基因羊，叫Polly,在它的乳汁中产出了重组蛋白IX 因子。 1 基因组整体水平的DNA甲基化检测： 将DNA降解为单核苷酸后采用诸如液相色谱或质谱等仪器区分甲基化与非甲基化的胞嘧啶。 2 MSRE（ methylation s