讲稿重组DNA技术.ppt

个体克隆：克隆羊多利的诞生 目的基因获取的方法： 1. 化学合成法 2. 基因组DNA文库(genomic DNA library) 3. cDNA文库(cDNA library) 4. 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR) 5. 通过杂交系统获取某些转录因子的编码DNA 酵母双杂交系统原理 真核基因转录因子常含有两个相对独立的结构域，即DNA结构域（BD）和转录激活结构域（AD），其转录活性激活作用需要这两个结构域共同完成。酵母双杂交系统使可能存在相互作用的A蛋白和B蛋白分别与BD 或AD形成杂合蛋白，在酵母中表达， A蛋白如果与B蛋白之间存在相互作用，就可以将 BD 和AD在空间上拉近，连接为一个整体与报告基因上游序列结合，发挥转录激活作用，使受调控的报告基因得到表达。而报告基因表达的产物可以通过其催化的反应被观察。 pBR322质粒的结构 ?噬菌体感染大肠杆菌的途径 噬菌体是感染细菌的病毒， λ噬菌体进入细菌体后，可将自身的DNA整合到细菌的染色体中去，和细菌的染色体一起复制（溶原性）。 另一类是噬菌体进入细菌体后，连续增殖，直到细菌裂解。释放出的噬菌体再感染其它细菌（溶菌性） 。 以?噬菌体为载体进行DNA克隆 Taq DNA聚合酶具有良好的聚合活性和热稳定性，常用于PCR。该酶具有5′→3′聚合酶活性及5′→3′外切酶