细胞工程和生物基因工程.pptVIP

基于目标DNA序列鉴定 DNA 杂交法 影印 碱解 杂交 感光 漂洗 取膜 ATGCCGTATGTGTCATAGC GGCATACACAG GCGTGTAAATGCGCGTAAA TTGTCGTAATGCGTAAGCC CCGTGTAAATGTCGACTAT 此类筛选法可区分目的重组子 与非目的重组子。 探针 基于目标DNA序列鉴定 PCR 扩增法 引物 A 引物 B 凝胶电泳检测PCR扩增产物 A / B A B 非 重 组 子 重 组 子 目 的 重 组 子 目的基因的克隆（分离获得） 实现基因工程三大用途的前提条件是从生物体基因组中克隆目的基因。目的基因获得之后，或确定其表达调控机制及生物学功能，或建立高效表达系统，构建具有经济价值的基因工程菌（细胞），或将目的基因在体外进行必要的结构功能修饰，然后输回细胞内改良生物体的遗传性状，包括人体基因治疗。 一般来说，目的基因的克隆战略分为两大类：一类是构建感兴趣的生物个体的基因文库，即将某生物体的全基因组分段克隆，然后建立合适的筛选模型从基因组文库中挑出含有目的基因的重组克隆；另一类是利用PCR扩增技术甚至化学合成法体外直接合成目的基因，然后将之克隆表达。 目的基因的克隆 鸟枪法克隆目的基因 cDNA法克隆目的基因 PCR法获得目的基因 化学合成法获得目的基因 目的基因的克隆 鸟枪法克隆目的基因 基因文库 目的基因的克隆 cDNA法克隆目的基因 煮沸 NaOH AAAAAAAAAAAAAA 5’ppp’5 G G AAAAAAAAAAAAAAOH 3’ TTTTTTTTTTTTTTp 5’ TTTTTTTTTTTTTTp 5’ TTTTTTTTTTTTTTp 5’ AAAAAAAAAAAAAAOH 3’ TTTTTTTTTTTTTT OH 3’ Klenow dNTPs S1 基因文库 5’ppp’5 G G AAAAAAAAAAAOH 3’ TTTTTTTTTTTp 5’ 逆转录酶 mRNA cDNA 目的基因的克隆 PCR法克隆目的基因 DNA复制（生物合成）的基本原理 5’p-ACCTCGTGTCAAAGCCGTCGATGTACGTTAGCCGC-OH 3’ 3’HO-TGGAGCACAGTTTCGGCAGCTACATGCAATCGGCG-p 5’ 3’HO-UCGGCG-p 5’ 5’p-ACCUCG-OH 3’ 引物 引物 5’ pppNR 5’ pppNR DNA聚合酶 模板 5’ 5’ 目的基因 5’ 变性 加热 5’ 5’ 引物 退火 5’ 5’ 底物 聚合 5’ 5’ 5’ 5’ 加热 变性 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 退火 引物 底物 聚合 加热 变性 引物 退火 底物 聚合 1 2 3 目的基因的克隆 化学合成法克隆目的基因 O H G H H H H O CH 2 O DMT P O Me N CH Me Me CH Me Me H DMT： 二甲氧基三苯甲基 激活 缩合 氧化 脱取代基 玻璃珠 连接臂 谢 谢 细胞工程与基因工程 华东理工大学 张惠展 B C A 生物工程的技术体系 细胞工程的基本原理 基因工程的基本原理 细胞工程与基因工程 酶 生物活性分子 天然细胞 天然细胞 干细胞 工程干细胞 工程细胞 组织器官个体 组织工程 组织器官个体 生物活性分子 发酵工程 细胞工程 代谢工程 分离工程 分离工程 酶工程 采集破碎 蛋白质工程 途径工程 基因工程 生物工程的技术体系 细胞工程 分离工程 分离工程 细胞工程的基本原理 细胞工程是指通过组织、细胞、细胞器水平上的筛选和改造，获得具有商业价值的人造组织（器官）、工程细胞株或细胞系，再通过规模化培养，制备特殊产品的技术和过程。细胞工程包括： 动植物细胞及组织大规模培养技术 动植物细胞融合技术 动植物细胞重组技术 干细胞技术（组织或器官再生技术，即组织工程） 植物细胞和组织的大规模培养技术 基本原理：植物细胞的分化全能性 动物细胞的大 规模培养技术 基本原理： 动物细胞的接触抑制性 动植物细胞融合技术 将两种不同性状的细胞在促融剂的帮助下融合在一起，并从中筛选出具有优异性能的杂合细胞。 例如，B淋巴细胞具有合成特异性抗体的性状，骨髓瘤细胞具有生长迅速的性状。将两者融合，就能筛选到集两者优点的杂合细 胞，即单克隆抗体技术。 细胞重组是把不同种类的细胞的部件重新组合装配，包括细胞核移植、叶绿体移植、核糖体重建及线粒体装配等，由此获得具有优良性能的重组细胞株或细胞系 动植物细胞重组技术 经历277次乳腺细胞核的移植实验；