动物细胞培养与核移植技术应用.pptVIP

（三）体细胞核移植的过程（以高产奶牛为例） 体细胞 培养 取出核 甲牛 乙牛 MⅡ卵母细胞 去除核 去核卵母细胞 重组 卵细胞 核植入 卵裂 早期胚胎 代孕母牛丙 移植 体细胞群 克隆牛 细胞核移植 胚胎移植 物理或化学方法激活 显微操作法 无性生殖 * * 知识回顾 植物细胞工程 植物细胞工程技术 植物细胞工程应用 植 物 组 织 培 养 植 物 体 细 胞 杂 交 植 物 繁 殖 的 新 途 径 作 物 新 品 种 的 培 育 细 胞 产 物 的 工 厂 化 生 产 重点 动物细胞培养的过程及条件。 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 难点 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 重点难点 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 那么动物细胞工程常用的技术手段呢？ 植物组织培养, 植物体细胞杂交 问题探讨 动物细胞工程： 动物细胞培养（基础） 动物细胞核移植 动物细胞融合 生产单克隆抗体 教学过程  从动物机体中取出相关的 ，将它分散成 ，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞 。 一动物细胞培养 1概念： 动物胚胎或 幼龄动物的组织、器官 如：肾、肺等 细胞生命力旺盛，分裂能力强 组织 单个细胞 生长和增殖 原理：细胞增殖 使细胞和培养液充分接触 注意关键词: 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 一动物细胞培养 2、过程： 阅读课本 一动物细胞培养 2、过程 幼龄动物 剪碎组织 取动物器官 和组织 细胞悬浮液 胰蛋白酶处理 单个细胞 胰蛋白酶处理 单个细胞 细胞贴壁 接触抑制 一动物细胞培养 原代 细胞培养 细胞培养 传代 2、过程 取 的组织、器官 细胞悬浮液 酶 贴满瓶壁的细胞 单个细胞 加入 液 动物胚胎或幼龄动物 胰蛋白 培养 接触抑制 原代 培养 1-10代细胞 40—50代细胞(细胞株) 传代培养 无限传代（细胞系） 用 处理 胰蛋白酶 细胞接触抑制 细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 细胞贴壁：指培养过程中，细胞贴附在瓶壁上的现象。 要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒。 一动物细胞培养 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞（10代以后）从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 遗传物质改变 具癌细胞特点 遗传物质未改变 培养器皿 3、条件： 1、无菌、无毒的环境 2、营养 3、温度和PH 4、气体环境： 补充合成培养基中缺乏的物质 一动物细胞培养 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 36.5 +0.5度 ；PH为7.2-7.4。 O2作用：进行 呼吸，提供能量 CO2作用：维持培养液的PH值 （95%空气和5% CO2 ） （葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。） 有氧 （1）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干 扰素、单克隆抗体等。 （2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。 （3）用于检测有毒物质 （4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据 4、应用 一动物细胞培养 2、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？ 3、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。 独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 1、进行动物细胞培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的主要物质是什么成分？用胃蛋白酶行吗？ 主要：蛋白质。 不能。多数动物细胞培养的适宜PH为7.2-7.4，胃蛋白酶在此环境中会变性失活。 细胞的全能性 细胞株