材料合成与制备艾塞那肽的合成.pptVIP

艾塞那肽的合成 1113510105 高燕 1. 实验材料 醋酸艾塞那肽标准品 0.23mmol/L Rink 酰胺 MBHA 树脂 TFA （三氟乙酸） TIS DIC DCM DMF Cl-HOBt 哌啶 苯酚 甲醇 乙腈 无水乙醚 苯甲醚 五氧化二磷 无水碳酸钾 水合茚三酮 1. 实验材料 ※多肽试剂 Fmoc-Ala-OH Fmoc-Arg(Pbf)-OH 9 Fmoc-Asn(Trt)-OH Fmoc-Asp(OtBu)-OH 9 Fmoc-Gln(Trt)-OH Fmoc-Glu(OtBu)-OH Fmoc-Gly-OH Fmoc-His(Trt)-OH Fmoc-Ile-OH Fmoc-Leu-OH Fmoc-Lys(Boc)-OH Fmoc-Met-OH Fmoc-Phe-OH Fmoc-Pro-OH Fmoc-Ser(tBu)-OH Fmoc-Thr(tBu)-OH Fmoc-Trp(Boc)-OH Fmoc-Val-OH Fmoc：9-芴甲氧羰基[可用作氨基保护基] 2 实验仪器 手动合成反应器 LC-10A型高效液相 DK-S24 型电热恒温水浴锅 TDL80-2B型台式离心机 SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵 FDU-1200型冷冻干燥仪 BS124S型电子天平 HZQ-Q全温振荡器 ZORBAX SB-C18型色谱柱；半制备柱(9.4*250mm)；分析柱（4.6*250mm）。 化学实验室常用设备及玻璃仪器：铁架台；升降台；圆底烧瓶；抽滤瓶；冷凝管；烧杯；试管等。 3 试剂处理 DMF（4L）加 80g 五氧化二磷放置 48h 以上，期间适当摇晃，然后 105℃油浴减压蒸馏出 DMF。此处理过的 DMF 专门用于配DIC、Cl-HOBt、25%哌啶溶液等。DCM（4L）加 100g 碳酸钾放置 48h 以上。 3 试剂处理 合成前需配备溶液： （1）DIC: 8mL DIC 加 DMF 至 100mL； （2）Cl-HOBt: 8.5g Cl-HOBt 加 DMF 溶解至 100mL； （3）脱保护试剂：25%哌啶溶液，哌啶加 DMF 配制； （4）茚三酮溶液：A：0.5g 茚三酮加乙醇至 10mL；B：40g 苯酚加乙醇 10mL；C：吡啶溶液。 （5）切割试剂：TFA：10mL；苯甲醚：0.5mL；苯酚：0.5g；Tis：0.5mL；水：0.5mL。 （6）纯化及分析流动相：A：乙腈（含 0.1%TFA）；B：水（含 0.1%TFA）。 4 实验原理 ※肽合成是一个反复添加氨基酸的过程，合成一般从 C-端（羧基端）向 N-端（氨基端）合成。固相合成基本过程是：先将所要合成肽链的 C-末端氨基酸以共价键的形式同一个不溶性的高分子树脂相连，然后脱去 N-端的氨基保护基使氨基暴露出来同下一步氨基酸的活化羧基反应，接长肽链。根据目标产物分子结构重复（缩合→洗涤→去保护→洗涤→下一轮缩合）操作，最后将肽链从树脂上切割下来得到粗品，再经过纯化等处理，即得到所要的多肽。 ※标准固相合成※ 按照艾塞那肽的氨基酸序列从 Ser 开始到 His 逐步缩合，氨基酸序列为： His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser。 分子量为 4186.6。称取 435mg(0.1mmol) Rink 酰胺 MBHA 树脂（负载量 0.23 mmol/L）装入反应器，加入 DMF 溶液 4mL 溶胀 30min。事先称好每步待反应的氨基酸，用量为树脂的 5 倍（0.5mmol）。 缩合反应 反应从 Ser 开始。反应步骤：加 25%哌啶溶液 4mL 混匀室温振荡 15min 脱树脂Fmoc 保护基，过滤后换新的哌啶重复一次，依次用 DMF、甲醇、DCM 洗涤树脂各2 次后抽干，加入第一步反应物 Ser（192mg）和缩合剂（1.1mL 的 Cl-HOBt 和 DIC溶液）室温振荡反应 2h，DMF、甲醇、DCM 洗涤树脂 2 次后抽干。之后按氨基酸顺序重复脱 Fmoc 保护基、缩合、洗涤 39 步至 N-端 His。最后脱除 His 上的 Fmoc 保护基，依次用 DCM、甲醇、DMF、DCM 各洗 2 次并抽干。 反应程度鉴定 在每一次缩合及脱保护结束后需鉴定一下反应是否完全，检测试剂为茚三酮试剂A、B、C，茚三酮试剂可与游离氨基反应程蓝色。取小米粒大小树脂颗粒放于试管中，分别加入茚三酮试剂 A、B、C