杜仲降血压成分的组合及血管舒张作用研究.doc

PAGE PAGE 1 杜仲降血压成分的组合及血管舒张作用研究 江春艳1，许激扬*1，卞筱泓*1，沈继朵1，阚静1，刘超晔2 （1.中国药科大学，江苏南京 210009 ；2.南京市产品质量监督检验院 江苏南京 210009） [摘要] 目的：本实验对杜仲降血压有效成分进行组合，研究单组分及组合物对大鼠胸主动脉的舒张作用。方法：从杜仲皮中提取降血压有效成分松脂醇二葡萄糖苷，绿原酸，京尼平苷，京尼平苷酸，槲皮素，芦丁，桃叶珊瑚苷，以大鼠胸主动脉环为标本，观察单组分以及各组分两两组合后对NE预收缩的血管舒张作用。结果：实验表明，组合后有效成分的舒血管作用较单个组分明显。结论：松脂醇二葡萄糖苷和槲皮素在组合比例为1：1时，其血管舒张作用最好。 [关键字]杜仲，降血压，成分组合，血管舒张，主动脉环 [中国图书分类号] [文献标识码] [文章编号] 杜仲是我国特有的传统名贵中药，中医很早就利用杜仲治疗类似高血压的症状。杜仲皮、叶中的降血压成分大致分为4类：木脂素类、苯丙素类、环烯醚萜类和黄酮类。现代中药药理学研究表明，杜仲中木脂素类化合物松脂醇二葡萄糖苷，苯丙素类化合物绿原酸、，环烯醚萜类京尼平苷酸、京尼平苷、桃叶珊瑚苷和黄酮类中的槲皮素、芦丁均有降血压作用[1]。 本实验室许激扬等[2]曾从杜仲中分离到的木脂素和黄酮类两种有效部位，以及绿原酸，京尼平苷，京尼平苷酸，并通过相互组合研究了组合物的血管舒张作用。 本研究在之前研究的基础上进一步分离出了PDG，桃叶珊瑚苷，槲皮素，芦丁4种降血压有效成分。与之前分离出的另外3种有效化合物进行两两组合，以大鼠胸主动脉环为标本，观察了单组分以及它们在不同的比列条件下的两两组合，对NE预收缩的血管舒张作用。从中筛选出最佳组合方式，为杜仲的进一步开发及临床用药提供理论依据。 1材料与方法 1.1 动物：SD雄性大鼠，体重180～250 g，由江宁县青龙山动物繁殖场提供,动物质量合格证号SCXK(苏) 200220018。 1.2 药品与试剂 1.2.1七种降压组分 表 1 本实验从杜仲中分离纯化出的七种降压组分及其制备方法 降压组分 制备方法 鉴定及含量检测 松脂醇二葡萄糖苷 溶剂萃取,大孔树脂层析，硅胶柱层析相结合[3，4] 薄层层析鉴定，高效液相色谱法检测含量[5] 绿原酸 铅盐沉淀，与溶剂萃取相结合 高效液相色谱 京尼平苷 溶剂萃取与固相萃取法相结合[6] 高效液相色谱 京尼平苷酸 同上 高效液相色谱 槲皮素 芦丁酸水解法 高效液相色谱 芦丁 碱溶酸沉法 高效液相色谱 桃叶珊瑚苷 溶剂萃取法，大孔树脂层析法[7] 高效液相色谱 1.2.2 其它试剂：重酒石酸去甲肾上腺素(NE，2g.L-1)；氯化乙酰胆碱（Ach,上海三爱思试剂有限公司 1.3 仪器 HV-4型离体组织器官恒温灌流系统（成都泰盟科技有限公司）；JZ-100型肌张力换能器（北京新航兴业科贸有限公司）；BL-420F生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司）；HW-1000型超级恒温水浴（成都泰盟科技有限公司）。 1.4 大鼠胸主动脉条标本的制备　 SD大鼠处死,迅速打开胸腔,取其胸主动脉,移入盛有4 ℃纯氧饱和K-H液的培养皿中。仔细剔除血管周围结缔组织,冲洗血管内血液,剪成长3～4 mm的血管环。一端用不锈钢钩垂直悬吊于血管平滑肌浴槽中,另一端接张力传感器,静息张力1.0 g 。浴槽中加入K-H液, pH 7.4,持续不断的通入纯氧, 37 ℃平衡2 h,每15 min换液1次。使用生物机能实验系统记录血管张力的变化。平衡期末,以60 mmol·L - 1的KCl预收缩血管环3次,检查血管活性。当达到最大收缩后洗脱, 平衡2 次, 每次15min。用NE( 10-6mol/L )预收缩动脉环,待收缩稳定加入乙酰胆碱(Ach) 10- 5mol·L - 1 ,血管内皮功能,以舒张幅度大于70%认为内皮完整 2 实验方法： 2.1 筛选出1：1组合下，血管舒张效果较好的组合 分别精密称取杜仲水提浸膏，七种有效组分单体，以及它们经过1：1两两组合后，配制成100 g.L-1的溶液，进样10次，每次2μl，累计进样加入NE预收缩的大鼠离体主动脉条，累加终浓度分别为（0.02，0.10, 0.20 g.L-1），对照组加入相同量的100 g.L-1的维拉帕米溶液，空白组加入相同体积的K-H 液，记录张力变化， 2.2 调节2.1筛选出的舒张效果较好的组合中两种成分的比例（分别按照1：9，2：8，3：7… 9:1