酶的竞争性抑制作用.pptVIP

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2019-07-22 发布于福建
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酶的竞争性抑制作用.ppt

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实验琥珀酸脱氢酶与丙二酸的竞争性抑制作用;一、实验目的 1、通过实验证明组织中存在琥珀酸脱氢酶 2. 验证丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂;;;二、实验原理竞争性抑制作用;琥珀酸在琥珀酸脱氢酶催化下脱氢生成延胡索酸，脱下的氢被受氢体接受。本实验用亚甲蓝（MB）作为受氢体，蓝色亚甲蓝接受琥珀酸脱下的氢由蓝色还原成无色的甲烯白（MBH2）。 ;丙二酸与琥珀酸分子结构相似，能竞争性抑制琥珀酸脱氢酶。通过观察在由不同浓度的琥珀酸与丙二酸组成的反应体系中使等量亚甲蓝退色的程度，从而鉴定丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用和抑制程度。;;;当抑制剂浓度高达一定程度;三、实验器材 1、组织捣碎机 2、试管 3、试管架 4、滴管 5、恒温水浴箱;四、实验试剂: 1、0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4） 2、1.5% 琥珀酸钠溶液　　 3、1% 丙二酸钠溶液 4、0.02% 亚???蓝溶液 5、液状石蜡 ;五、实验方法; 试剂（滴）管号;管号 1 2 3 4;七、注意事项 1、加试剂前一定要将试管清洗干净 2、加入液体石蜡后就不要再摇动试管。避免空气中的氧接触反应溶液，使得还原型的甲烯白重新氧化成蓝色 3、37℃水浴保温过程中，要注意随时观察各试管的褪色情况 ; 六、实验结果;六、思考题 1、解释各管颜色变化的原因 2、本实验中液体石蜡起什么作用？ 3、各管中的反应体系配好后为什么不能再摇动? 4、制备肝匀浆时用磷酸盐缓冲液，可否换用蒸馏水，为什么？ 5、举例你所学过的以竞争性抑制为作用机制的临床药物，阐述其发挥药效的生化机理。