生物-三年模拟精选 专题二十五.doc

A组　基础巩固 1.(2015·天津六校第一次联考)在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因(kan)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。请据图回答： (1)A过程需要的酶有________________。 (2)要把重组质粒导入土壤农杆菌，首先必须用________处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为________态；将________在缓冲液中混合培养完成转化过程。 (3)含有重组质粒的土壤农杆菌侵染离体棉花叶片组织后，将离体棉花叶片组织培养成再生植株要经过[D]________和[E]________。如要确保再生植株中含有抗虫基因，可在C过程的培养基中加入________。 (4)如想利用分子杂交技术检测再生植株中的抗虫基因是否转录，应该用放射性同位素标记的目的基因作为探针与________杂交。 解析　(1)图中A为基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，还需DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒。 (2)将重组质粒导入微生物细胞时，常采用感受态细胞法，即首先用Ca2＋处理微生物细胞，使之成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞；然后将重组质粒和感受态细胞在缓冲液中混合培养完成转化过程。 (3)将离体棉花叶片组织培养成再生植株还需要采用植物组织培养技术，该技术包括脱分化和再分化两个过程。由图可知，标记基因是卡那霉素抗性基因，因此可用含有卡那霉素的培养基筛选含有抗虫基因的再生植株。 (4)检测目的基因是否转录出mRNA常采用分子杂交技术，即以标记的目的基因为探针与mRNA分子杂交。 答案　(1)(同一种)限制酶、DNA连接酶(缺一不可) (2)Ca2＋　感受　重组质粒和感受态(农杆菌)细胞(答一个不给分) (3)脱分化　再分化　卡那霉素 (4)mRNA 2.(2015·北京海淀期中考试)为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。 (1)研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用________法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因。在上述引物设计时，分别在引物中加入如图甲所示酶的识别序列，这样可以用________酶处理两个基因后，得到________端(填图中字母)相连的融合基因。 (2)将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T－DNA中，构建________并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含____________的固体平板上培养得到单菌落，再利用______________培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液。 (3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是_______________， 进一步筛选后获得转基因油菜。 (4)提取上述转基因油菜的mRNA，在________酶的作用下获得cDNA，再依据________的DNA片段设计引物进行扩增，对扩增结果进行检测，可判断融合基因是否完成________。 解析　(1)研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用PCR法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因。在上述引物设计时，分别在引物中加入如图甲所示酶的识别序列，这样可以用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后，得到A、D端相连的融合基因。 (2)将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T－DNA中，构建表达载体即重组质粒并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液。 (3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜。 (4)提取上述转基因油菜的mRNA，在逆转录酶的作用下获得cDNA，再依据融合基因的DNA片段设计引物进行扩增，对扩增结果进行检测，可判断融合基因是否完成转录。 答案　(1)PCR　ClaⅠ(限制酶)和DNA连接　A、D (2)表达载体(或“重组质粒”)　四环素　液体 (3)利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞 (4)逆转录　融合基因　转录 B组　能力提升 1.(2015·江苏如皋期中考试)下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。请回答： (1)天然质粒往往需经过改造才能作为基因工程中的运载体，经改造后的质粒同时具备的条件有____________(填序号)。 ①标记基因　②多个限制酶切割位点　③对受体细胞无害　④启动子　⑤起始密码子 (2)若对图1中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性将会________。 (3)用图2中的人乳铁蛋白目的基因和图1所示的质粒构建重