高效液相色谱法在中药化学指纹图谱研究中的应用.pptVIP

高效液相色谱法在中药化学指纹图谱研究中的应用;1.1中药指纹图谱的定义;中药生物指纹图谱;1.2指纹化学图谱的起源与发展;光谱指纹图谱 联用技术指纹图谱 ;色谱指纹图谱; 高效液相色谱不受样品挥发度和热稳定性的限制，样品中大多数成分均可在高效液相色谱仪上进行分析检测，是构建指纹图谱的主要方法之一。由于中药成分的复杂性，构建指纹图谱一般采用梯度洗脱，因为逐步提高流动相洗脱能力可获得较多色谱峰，提供更多指纹信息。;中药化学指纹图谱;1.3指纹化学图谱研???的直接目的;1.3.1对中药质量控制的补充和提高; 《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》要求将指纹图谱检测指标限定作为质量标准单列项目，这种做法是对现行中药质量控制标准的有益补充。;　 一个理想的指纹图谱不仅能达到定性鉴别的目的，色谱图中大部分色谱峰应达到基线分离，对大部分成分应可进行定量分析。在没有对照品的情况下，也可以用已知标准品针对其他未知或无标准品的色谱峰进行定量。因此，可以说中药指纹图谱是对现行中药质量标准控制方法的提高。;1.3.2控制中间体、成品的一致性，减少批间差异; 中药化学指纹图谱中，有相当部分为次生代谢产物，而这些产物的组成和含量不仅和药材本身的种属有关，同时还与植物后天所处的地域环境、生长条件、采摘时间和炮制方法有很大的关系。对于中成药来说，与产品的加工过程也有很大的联系。不同的加工过程与方法都将对所得的指纹图谱有相当影响，表现在峰高、峰面积、保留时间以及峰数量上的变化等。因此，中药化学指纹图谱不仅可以用来对生药的真伪、优劣进行鉴定，同时还可以对中药的加工过程进行监测，可以有效地分析鉴定经过不同的炮制、加工的中成药。; 虽然无论是原药材、中间体还是成品，都因组方已固定、生产工艺相对恒定，而使药品的安全性不可能直接通过指纹图谱来保障，但因为中药指纹图谱可直接解决中间体、成品的批间一致性及稳定性问题，从而可以间接并最终保障成品的安全性和有效性。;样品收集 供试品的制备 参照物的选择与制备 色谱条件的优化 样品测试及方法学考察 指纹图谱的建立 指纹图谱的分析与评价;用于鉴别中药材的真伪、易混淆品种； 用于评价中药材、饮片质量控制； 用于中药提取物或制剂中间体的质量控制； 用于中成药的质量监控； 用于研究中药的稳定性。;示例一： HPLC指纹图谱法鉴别远志及其伪品 李云峰，房敏峰，张文娟，等. 西北大学学报(自然科学版),2019, 38(2):265.;1-1色谱条件： 色谱柱：Hypersil C18柱(4.6mm× 250mm，5μm)；流动相：乙腈-0.5%磷酸(25:75)；流速 ：1.0mL/min；检测波长：310nm；柱温：40℃；进样量：20μL。指纹图谱记录时间1 h。;1-2供试液的制备 精密称取远志、卵叶远志、白薇、麦冬须根药材各10g，分别置100mL锥形瓶中，加50%甲醇25mL，超声30min，过滤，滤液用50%甲醇定容至25mL，备用。;2方法学考察 2-1精密度试验 取陕西合阳远志药材的供试品溶液，连续进样5次，每次20μL，检测色谱峰，测定各峰的相对保留时间和相对峰面积，结果各峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2.1%，符合指纹图谱技术要求，说明测定方法精密度高。;2-2稳定性试验 取陕西合阳远志药材的供试品溶液，分别在0，3，5，8，12，24 h进样,每次20μL，检测色谱峰，各峰相对保留时间的RSD为0.8%~1.2%，相对峰面积的RSD为1.0%~2.6%。结果表明：供试品溶液常温下在0~24h之间可保持稳定。;2-3重复性试验 取陕西合阳远志样品5份，按1.2供试品溶液的制备方法，在1.1色谱条件下检测色谱峰，结果其相对保留时间和相对峰面积稳定，各峰相对保留时间和相对峰面积的RSD小于2.8%，符合指纹图谱技术要求，说明本方法重复性良好。;2-4指纹图谱的建立及分析结果;存在16个共有指纹峰。 ;存在15个共有指纹峰。;白薇和麦冬须根的高效液相色谱图 ;;示例一： 不同采收期连翘的HPLC 指纹图谱研究 郑晓珂，魏悦，冯卫生. 中国实验方剂学杂志,2019,13(3):1.;1-1色谱条件 色谱柱：Shim-pack CLC-ODS(150 ×4.6mm)；检测波长：235nm；柱温：25；流速：0.8mL/min; 流动相: 乙腈(A)/ 水(B) 梯度洗脱。线性梯度程序: 0~10 min, 10%~17% (A)；10~30min，17%~35% (A)；30.01min，50%(A)；45min，80% (A)；50min，STOP。;1-2供试品溶液的制备