动物基因组DNA及RNA制备.pptVIP

动物基因组DNA/RNA 提取及含量测定 指导教师:谢承志 目的要求 学习和掌握从动物组织中提取核酸的原理和操作技术 了解提取DNA/RNA的几种方法，原理和优缺点 学习测定DNA/RNA含量的基本原理及具体方法 实验原理 核酸和蛋白质是构成生物有机体的主要成分；核酸是生命的最基本物质。核酸按其化学组成可以分成两大类，一类含D-2-脱氧核糖的称为脱氧核糖核酸（DNA），主要存在于细胞核中；另一类含D-核糖的称为核糖核酸（RNA),主要存在于细胞质内；在生物体中它们结合成核蛋白的形式存在。由于核酸极不稳定，在较剧烈的化学，物理因素和酶的作用下很易降解，因此在制备时应防止过酸、过碱及其它引起核酸降解的因素作用。 一RNA的提取与测定 由于RNA的种类来源很多，因而提取制备方法各异，一般有苯酚法，去污剂法和盐酸胍法，其中苯酚法实验室最常用。组织匀浆后用苯酚处理离心，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，向水相加冷乙醇后， RNA即以白色絮状沉淀析出。此法较好除去DNA和蛋白质，且获得生物活性的RNA RNA含量测定 RNA含量的测定方法很多：紫外吸收法、定磷法、地衣酚 本实验用地衣酚测定，其原理是：当RNA与浓盐酸共热时，即可发生降解，形成核糖继而转变成糠醛，后者与3.5－二羟基甲苯（地衣酚）反应，在铁或铜离子催化下，生成鲜绿色复合物，反应在670nm处有最大吸收峰，RNA浓度在