高效液相色谱直接衍生化法测定血清游离脂肪酸组成.pdfVIP

·4 12 · J ou rna l of C lin ica l and Exp erim en ta lM ed icine Vol. 9, N o. 6　M a r. 20 10 高效液相色谱直接衍生化法测定血清游离脂肪酸组成 论著 1 2 3 3 2 刁宏斌 　王顺 　赵新峰 　郑晓辉 　马爱群 (陕西省华阴市黄工集团医院　陕西 　华阴　7 14200; 2 西安交通大学第一附属医院心内科 , 环境与疾病相关基因教育部重点实验室 ,心血管离子通道病研究室 　陕西 　西安 　7 1006 1; 3 西安交通大学中草药现代化研究及工程中心 　陕西 　西安 　7 10049) ( ) 　　【摘要 】　目的　脂肪酸摄入和代谢在高血压的发病和进展中发挥作用 ,但血清游离脂肪酸 FFA 组成测定方法尚 未统一 ,本研究探讨高效液相色谱直接衍生化法测定空腹血清游离脂肪酸组成的可靠性 。方法 　社区筛选出原发性高 血压患者 103例 ,其中肥胖患者 65例 ,非肥胖患者 38例 ,和血压正常个体 128例 ,其中肥胖个体 70例 ,非肥胖者 58例 , 年龄 35～59 岁 ,各组饮食习惯相近 。采空腹静脉血离心取上清分成两个 1. 5 m l,用 75%的乙醇 60 ℃下除去血清中与 ( ) ( FFA 结合的白蛋白,无需常规的分离步骤 ,应用 2 - 硝基苯肼盐酸盐 2 - N PH ·HCl 作为衍生试剂 ,在 1 - 乙基 - 3 - 3 ) ( ) - 二甲基氨丙基碳化二亚胺 盐酸盐 1 - EDC ·HCl 的催化下 ,直接衍生血清中的 FFA ,形成不挥发的能在紫外 - 可见 光区产生吸收的脂肪酸的肼盐衍生化物 ,再用磷酸缓冲液酸化增加各种脂肪酸的分离度 ,衍生化的脂肪酸用正己烷萃 取法与其它的酰肼和干扰成分分离出来 ,氮气吹干后甲醇定容 ,应用 C18反向色谱柱进样 30 m in 内洗脱分析测定 。结 果 　共测定血清中主要的 9种脂肪酸 ,从 C16: 0到 C22: 6,未鉴定的峰少于总量的 1% 。脂肪酸组成以个体脂肪酸浓度 μ μ 表示 ,浓度单位 mo l/L 。应用 C17: 0作内标 ,各脂肪酸测定的线性范围为 2. 6 ～200. 0 mol/L , 回收率在 87. 8% ～120. 5%之间 ,重复性检验变异系数 10% ,相关系数为 0. 973 ～0. 999,批内 R SD 范围为 2. 78% ～12. 90% ,批间 R SD 范围为 ( ) ( 为 0. 95% ～15. 4 % 。与血压正常个体比较 ,原发性高血压患者血清游离多不饱和脂肪酸 PU FA