酵母菌的计数和血球计数板的使用实验报告.doc

基础生物学技术实验 吴雪薇 121140059 C1组 2013-2-25 实验一：酵母菌的计数和血球计数板的使用 吴雪薇 121140059 实验目的 复习显微镜的使用。 学习血球计数板的使用。 计数并计算酵母菌的含量。 实验原理 血球计数板被用以对人体内红、白血球进行显微计数之用，也常用于计算一些细菌、真菌、酵母等微生物的数量，是一种常见的生物学工具 。 血球计数板是一块特制的厚型 载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的 平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个 方格网共分九个大方格，中央的一大方格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个中方格（大方格用三线隔开），而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个中方格（中方格之间用双线分开），而每个中方格又分成16个小方格。（本实验使用的是第二种。）但是不管计数区是哪一种 构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为lmm2，每个小方格的 面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的 体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。 因此，数出小方格中酵母菌细胞的数量后，计算小方格内酵母菌细胞数的平均值，再乘以25可得每0.1mm3内酵母菌细胞的数量，继而计算出每ml酵母菌细胞数。 血细胞计数的误差分别来源于技术 误差和固有误差。其中由于操作人员采血不顺利， 器材处理、使用不当，稀释不准确，细胞识别错误等因素所造成的误差属技术误差；而由于 仪器（计数板、盖片、 吸管等）不够准确与精密带来的误差称仪器误差，由于 细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差属于分布误差或计数域误差。仪器误差和分布误差统称为固有误差或系统误差。技术误差和仪器误差可通过规范操作、提高熟练程度和校正仪器而避免或纠正，但细胞分布误差却难于彻底消除。 实验器材 光学显微镜、血球计数板、盖玻片、吸管等。 实验试剂 1g/5000ml的酵母菌培养液。 实验操作 洗净、擦干血球计数板和盖玻片，镜检确定上面没有残留的酵母菌细胞。 将盖玻片盖在血球计数板的凹槽上。 摇匀酵母菌培养液，立即吸取培养液加入血球计数板的凹槽中。 在显微镜下观察，取5*5方格的左上、右上、左下、右下、中间五个方格，计数每个方格内的酵母菌细胞数并记录。 重复以上步骤。 计算方格内酵母菌细胞数的平均值，并得到培养液中酵母菌的含量。 实验结果 计数培养液中酵母菌含量的实验记录表 序号 方格位置 第一次取样 第二次取样 第三次取样 第四次取样 第五次取样 平均值 左上（单位：个） 26 19 33 25 11 右上（单位：个） 17 11 21 30 9 左下（单位：个） 35 13 22 23 18 右下（单位：个） 21 13 21 27 15 中间（单位：个） 27 12 34 19 5 平均值（单位：个） 25.2 13.6 26.2 24.8 11.6 酵母菌含量 （单位：万个/ml） 630 340 655 620 290 507 实验结论 本次实验所取用的酵母菌培养液中，酵母菌的含量为507万个/ml。 本次实验所取用的酵母菌粉中，酵母菌含量大约为2535万个/mg。 注意事项 血球计数板和盖玻片在加入培养液前必须洗净、擦干，镜检确定没有残余的酵母菌细胞和水之后方能使用，否则会影响计数的准确性。 必须先盖上盖玻片，再加入酵母菌培养液，以确保盖玻片下培养液的厚度是0.1mm，盖玻片不是浮在上面。 酵母菌培养液是悬液，放置时间较长就会沉积分层，因此在取样前必须摇匀培养液并立即取样加入，中途不可停滞。 对于压在方格线上的酵母菌细胞，应只计数中方格上边线和左边线上的细胞个体（或只计数中方格下边线和右边线上的细胞个体），而不要计数下边线和右边线上的个体。 对于成团块聚集在一起的酵母菌细胞，应数出团块中所有的细胞数。 血球计数板的清洁用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用有机溶剂脱水使其干燥。