微生物遗传学三.pptVIP

第五节 微生物的诱变育种 二、几种重要突变株的筛选方法 1. 抗性突变株的筛选 (1) 抗终代谢物结构类似物突变株的筛选 (2) 抗药性突变株筛选 2. 营养缺陷型的筛选 1. 抗性突变株的筛选 （1）抗终代谢物结构类似物的突变株 用途：筛选相应代谢物的高产菌株 （2）抗药性突变株 用途：筛选相应药物(抗生素) 的高产菌株或遗传标记制作 筛选的方法: a. 高于临界浓度的平板进行分离； b. 梯度平板法 a. 不含维生素的酪素水解液或氨基酸混合液或蛋白胨 b. 水溶性维生素混合液 c. 0.1%碱水解酵母核酸液 以氨基酸缺陷为例进行说明 将18种氨基酸按右表分为6组 特点：每2组只有一种共同物质 （3）营养缺陷型的用途 生产菌 (氨基酸、核苷酸、维生素等高产菌需求)； 研究代谢途径和杂交、转化等遗传规律的遗传标记。 诱变育种的程序：实验讲义p174 出发菌株（纯化） 前培养（ CM ，培养至对数期） 菌悬液制备 活菌计数 诱变预备实验（剂量存活率曲线） 诱变处理（相对杀菌率为70-75%，30-70%） 活菌计数 中间培养（CM，培养过夜，克服表型延迟） 突变株分离 初筛 复筛 生产性能试验 菌种（鉴定与）保藏 1. 从生产中选育 2. 定向培育优良品种 一般指用特定因素长期处理微生物群体，同时不断地对它们进行移种传代，以达到积累并选择相应的自发突变株的目的。 例：卡介苗（牛型结核分枝杆菌的减毒活菌苗） 第六节 原核生物的基因重组 基因重组（gene recombination）： 将两个不同性状个体的基因通过一定的方式转移到一起，并发生重新组合，产生新的遗传性状的过程，称为基因重组(gene recombination)或遗传重组。 重组：遗传物质在分子水平上发生的交换； 杂交：在细胞水平上遗传物质的交换. 杂交必然包含着重组，但重组不仅限于杂交这一形式。 原核生物的基因重组类型 4种形式：1）转化 2）转导 3）接合 4）原生质体融合 (2) 转化过程 * * 一、诱变育种中的几个原则 指利用物理或化学诱变剂处理微生物群体细胞，促进其突变率显著提高，然后设法从中选取少数符合育种目的的突变株。 2个主要环节： 诱变（随机） 选用合适的诱变剂和诱变剂量处理大量均匀、分散的微生物细胞，以引起绝大多数细胞致死的同时，使存活个体中的突变频率大大提高。 筛选（定向） 设计有效的筛选方法，将少量正变株中的优良菌株挑选出来。 （一） 出发菌株（original strain） 出发菌株指用于诱变育种的起始菌株。 具有有利性状（如高产、生长速度快、营养要求粗放、 标记明显等）； 对诱变剂敏感 野生型菌株； 从生产中选育的自发突变菌株； 诱变获得的高产菌株 出发菌株的选择标准： 出发菌株的来源： （二） 菌悬液的制备 1. 选用单细胞或单孢子悬液（均匀、分散） 目的：①使每个细胞能均匀接触诱变剂； ②减少表型延迟现象（诱变后性状的分离及退化现象） 2. 同步培养（生理状态一致） 3. 菌龄：对诱变剂最敏感时期 营养细胞：对数期 孢子或芽孢：萌发前期 4.菌悬液的制备方法 物理诱变：生理盐水配制 化学诱变：缓冲液配制 5. 菌悬液的浓度