第二章细胞分离及破碎.pptVIP

??为便于进行转速和相对离心力之间的换算，Dole 和Cotzias 利用RCF的计算公式，制作了转速“rpm”、相对离心力“RCF”和旋转半径“r”三者关系的列线图。换算时，先在r标尺上(单位rpm)取已知转速， 在RCF标尺上取已知的离心半径(单位cm)，将这两点间划一条直线，与图中g标尺上的交叉点即为相应的相对离心力数值。 按速度和离心力： 1.常速离心机 最大转速8000rpm(r/min),相对离心力(RCF)104g以下,用于细胞、菌体和培养基残渣等分离； 2.高速（冷冻）离心机 1×104-2.5×104rpm，相对离心力104~105g,用于细胞碎片、较大细胞器、大分子沉淀物等分离； 3.超速离心机 转速2.5-8×104rpm，相对离心力5*105g；用于DNA、RNA蛋白质、细胞器、病毒分离纯化；检测纯度；沉降系数和相对分子量测定等。 （一）离心机的种类与用途 对于常速和高速离心机，由于所分离的颗粒大小和密度相差较大，只要选择好离心速度和时间，就能达到分离效果。 超速离心的离心方法：差速离心、密度梯度离心和等密度梯度离心。 1. 差速离心分级 2.区带离心 （密度梯度离心） 差速区带离心 平衡区带离心 （二）离心分离方法 1.差速离心: 工业上最常用的离心分离方法 菌体、细胞 大小/μm 离心力/g 实验室 工业规模 大肠杆菌 2-4 1500 13000 酵母 2-7 1500 8000 红细胞 6-9 1200 － 淋巴球 7-12 500 － 肝细胞 20-30 800 － 2.区带离心——多用于生化研究 事先在离心管中用某种低分子溶质调配好密度梯度，在密度梯度之上加待处理的料液后进行离心。 常用密度梯度物质： 蔗糖、CsCl、NaBr 实验室常用的转子 按离心机的作用方式： 斜角式 平抛式 管式 蝶式 螺旋式 多室 （三）离心机的种类与用途 （1）斜角式离心机 是一类结构最简单的实验室常用离心机， 指离心管腔与转轴成一定倾角的转子； 颗粒在角转子中沉降时， 先沿离心力方向撞向离心管， 然后再沿管壁滑向管底， 因此管的一侧会出现颗粒沉积。 （1）斜角式离心机 结构稳定， 可装载较多的样品 使用较高的转速。 加速或减速时，对样品 有搅动。 大容量冷冻离心机 (2）平抛式离心机 一类结构简单的实验室常用的低中速离心机，转速一般在 3000-6000rpm。 转子活动管套内的离心管，静止时垂直挂在转头上，旋转时随着转子转动，从垂直悬吊上升到水平位置。 转头结构复杂，最高 转速相对要低 容量也小一些。 平抛式离心机转子 (３）管式离心机 管式离心机是一种分离效率很高的离心分离设备，其转鼓细长，可在15000-50000的高转速下工作。设备简单、操作稳定。 适用范围 细胞、细胞碎片、细胞器、病毒、蛋白质、核酸等。特别适合一般分离机难以分离的固形物含量1% 发酵液的分离。 （3）管式离心机 (4）碟片式离心机 碟片式：适合 大规模工业生产 (4）碟片式离心机 是传统离心机，为目前工业上应用最广泛的离心机。最大处理量达到300m3/h，常用于大规模的分离过程。 在转鼓中加入了许多重迭的碟片，缩短了颗粒的沉降距离，提高了分离效率。 适用范围 细菌、酵母菌、放线菌、细胞碎片 5.螺旋式离心机 三、过滤分离 过滤操作是借助于过滤介质，在一定的压力差ΔP作用下，使悬浮液中的液体通过介质的孔道，而固体颗粒被截留在介质上，从而实现固液分离的单元操作。 过滤介质: 过滤采用的多孔物质； 滤饼或滤渣 :被截留的固体物质。 过 滤 filtration 过滤推动力： 悬浮液自身压强差、重力 悬浮液的—外加压力 过滤介质的—抽真空 过滤阻力： 介质阻力：一般过滤初较明显 滤饼阻力: 滤饼厚度：随过滤进行而增加 饼特性：颗粒形状、大小。 大多情况下，过滤阻力主要取决于滤饼阻力。 1.过滤介质选择 过滤介质起过滤作用，还是滤饼的支撑物。应具有足够的机械强度和尽可能小的流动阻力。 合理选择过滤介质： 过滤介质所能截留的固体粒子大小：通常以过滤介质的孔径表示。常用的过滤介质中，纤维滤布所能截留的最小粒子约10μm，硅藻土为lμm，超滤膜可小于0.5μm。 过滤介质的透过性：是指在一定的压力差下，单位时间单位过滤面积上通过滤液的体积量，它取决于过滤介质上毛细孔径的大小及数目。 -织物介质 又称滤布，应用最广泛，包括由棉、麻等天然纤维滤布和合成纤维滤布。 -粒状介质 有硅藻土、珍珠岩粉、细砂、活性炭、白土等。 -多孔固体介质 如多孔陶瓷、多孔玻璃、多孔塑料等 过滤介质 典型过滤设备： 实验室用抽滤装置 板框压滤机（间歇操作）