第八章特殊毒性和其试验及评价方法3.pptVIP

（2）细胞毒物：可能引起细胞死亡，导致细胞增殖活跃及癌发展。 如氮川三乙酸使锌进入肾脏，由于锌的毒性，造成细胞死亡，结果引起增生和肾肿瘤。 动物种属的选择，应考虑受试物可能作用的靶器官。 大鼠 肝癌 小鼠 呼吸道和肺肿瘤 金黄仓鼠、狗或猴 膀胱癌 靶器官无法估计 大鼠和小鼠 （3）病理检查 动物自然死亡或处死后必须及时进行病理检查，包括肉眼和组织切片检查。组织切片检查应包括已出现肿瘤或可疑肿瘤的器官和肉眼检查有明显病变的器官，应注意观察癌前病变。通过病理检查确定肿瘤的性质和靶器官。 统计各种肿瘤的数量（包括良性和恶性肿瘤）及任何少见的肿瘤、患肿瘤的动物数、每只动物的肿瘤数及肿瘤潜伏期。 肿瘤发生率（％）＝（实验结束时患肿瘤动物总数/有效动物总数）×100％ 式中，有效动物总数指最早发现肿瘤时存活动物总数。 应着重报告发现肿瘤的部位、数量、性质、癌前病变，以及其他毒性效应； 应报告剂量-反应关系及统计学分析结果。 如在动物组织中观察到良性和恶性肿瘤，并有良性肿瘤向恶性化进展的证据，在进行统计学分析之前将良性和恶性肿瘤合并是适宜的，但仍希望分别对良性和恶性肿瘤分别进行统计学处理。 ①小鼠皮肤肿瘤诱发试验 于小鼠皮肤局部连续涂抹受试物，以观察皮肤乳头瘤和癌的发生，一般20周可结束实验，较敏感的小鼠为SENCAR小鼠。此试验也可设计为检测受试物的引发活性或促长活性。 典型的引发剂为致癌性多环芳烃，促长剂为佛波醇酯(TPA)。 ②小鼠肺肿瘤诱发试验 染毒途径常用腹腔注射，也可灌胃或吸入，一般16~30周可结束实验，观察肺肿瘤的发生。较敏感的小鼠为A系小鼠。此试验也可设计为检测受试物的引发活性或促长活性。 典型的引发剂为乌拉坦（抗肿瘤药物），促长剂为二丁基经基甲苯(BHT)。 ③大鼠肝转化灶诱发试验 对大鼠进行肝大部切除术后，给以受试物，一般可在8～14周结束实验，观察肝转化灶生成。肝转化灶是癌前病变，有γ-谷氨酰转肽酶活性升高，G6P酶和ATP酶活性降低，以及铁摄取能力降低。转化灶可用组织化学或免疫化学方法鉴定。 此试验也可设计为检测受试物的引发活性或促长活性。 典型的引发剂为二乙基亚硝胺(DEN)，促长剂为苯巴比妥(PB)。 ④雌性大鼠乳腺癌诱发试验 一般可用SD大鼠（或Wistar大鼠），实验周期为6个月。多环烃芳香胺、氯烷、亚硝基脲等能在9个月以内诱发乳腺癌。 此四个试验不是成组试验，应根据受试物的特点选择使用。此四个试验任一试验得到阳性结果的意义与长期动物致癌试验相似，但阴性结果并不能排除受试物的致癌性。 原理：癌细胞与正常细胞的不同是其核型的改变和因此而导致的生长自控能力的丧失。 细胞自控能力丧失可能导致细胞在离体培养时生长特性改变。 正常细胞：在液体培养时，克隆中的细胞排列有序、只能生长成单层； 癌细胞：贴壁生长的克隆失去接触抑制的能力，因而形成的“恶性转化”克隆中的细胞排列杂乱，重叠生长。 判断是否出现了细胞的恶变，须将转化的细胞植入试验动物体内，观察转化的细胞是否可发展成肿瘤。 恶变的细胞表现 细胞偏大，且大小不等； 核大而畸形，染色质深染而粗糙，核浆比例倒置，核膜粗厚，核仁增生而肥大； 核仁核胞浆因RNA增多而偏酸性，呈嗜碱性染色而偏蓝； 多见核分裂现象； 正常的接触抑制消失，它的克隆是多层细胞且排列紊乱； 生长表型改变。 常用的细胞种类 细胞选择的主要原则： 1、体外容易培养和传代，阴性细胞克隆背景较低； 2、细胞自发突变率低，或自发转化能力很弱； 3、已获得无限生长能力，但仍保持接触抑制而无致肿瘤性。 优点：试验周期短，经济方便；一个细胞克隆或细胞巢就相当于一只受试动物；受试物直接与靶细胞作用，便于控制剂量，不受吸收、代谢、分布的影响，并且可不受体内免疫系统等干扰；便于观察。 缺点：仍存在假阳性、假阴性等问题。 （1）转癌基因小鼠 与转录启动子连接的癌基因转入后可直接在某些特定的组织中高效表达，使该组织细胞处于引发状态，这类转基因动物是研究化学物致癌作用的敏感体系。携带癌基因的转基因动物可用于致癌试验，试验周期仅3个月左右，有希望发展成代替长期动物致癌试验的试验系统。 这些携带有癌基因的转基因动物，可用来研究外源化学物与肿瘤相关基因的作用及外源化学物在致癌不同阶段中的作用机制。以各种组织特异性的促长剂处理转入不同癌基因的小鼠，可为致癌过程的研究提供新线索。 （2）肿瘤抑制基因敲除小鼠 在P53-/-小鼠，肿瘤(特别是淋巴肉瘤)的发生比正常小鼠(P53+/+)增加而