2019动物细胞融合和单克隆抗体课件最终.pptVIP

2.1.1动物细胞融合与单克隆抗体 2018年诺贝尔生理学或医学奖授予免疫学家艾利森和本庶佑。他们是因为研究了针对免疫具有“刹车片”作用的蛋白质，以及在癌症治疗上的新应用。蛋白质CTLA-4具有抑制T细胞功能的作用，给患者注射抗CTLA-4的抗体，能够阻碍这一抑制作用，使得T细胞活性加强，而PD-1蛋白则是另一种抑制T细胞活化的刹车装置会被癌细胞主动利用，是多种癌细胞逃避T细胞攻击的作弊手段。给患者注射抗PD-1的抗体，该抗体会与PD-1结合，松开刹车，导致T细胞活化。 抗体的传统生产方法 从血清中分离抗体 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差。 多种浆细胞 动物体内 多种抗体 抗原 反复注射 需解决问题：获得大量、单一的抗体 单个B淋巴细胞 克隆单个B淋巴细胞 概念：用______________进行____，也就是利用_____________技术培养形成细胞群，从而产生大量的______________________的抗体，即单克隆抗体。 单个B淋巴细胞 克隆 动物细胞培养 化学性质单一，特异性强 二、单克隆抗体 （二）单克隆抗体及其制备 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖 杂交瘤细胞 设计方案： 单克隆抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞 单个B淋巴细胞在体外培养的条件下能无限增殖吗？ 阅读课本p53-54 ①为什么给小鼠注射羊的红细胞？ 获得产生相应抗体的B淋巴细胞 ② 细胞两两融合后，产生几种融合细胞？ BB 、B瘤 、瘤瘤 （融合的细胞有3种） ③ 杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？ （一选）即要在选择性培养基上 筛选出杂交瘤细胞 ④得到的杂交瘤细胞只有一 种吗？ 已经 免疫 几种类型？ √ ⑤如何得到能够产生单一抗体 又可大量繁殖的杂交瘤细胞呢 (二选)筛选出能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞 使其数量增殖：动物细胞培养 方法：用专一抗原与这些细胞产生的抗体结合 克隆化培养 和抗体检测 淘汰 注意：两种筛选的方法 和目的不同 体外培养 小鼠腹腔内培养 ◆涉及技术： 动物细胞培养 动物细胞融合 细胞培养液 小鼠腹水 原理 ：抗原抗体特异性结合 ⑥利用杂交瘤细胞得到大量单克隆抗体的两条途径？ 单克隆抗体制备过程 已免疫的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 B-B细胞 B-瘤细胞 瘤-瘤细胞 选择性培养基 杂交瘤细胞（ B-瘤细胞） 克隆化培养 抗体检测 产生所需抗体的杂交瘤细胞 体外培养 小鼠腹腔内增殖 单克隆抗体 小结 单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞 工程技术手段？ 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 在选择性培养基上筛选出 杂交瘤细胞 筛选出能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞 （浆细胞） 单克隆抗体的应用 （1）作为诊断试剂——最广泛应用 （一）单克隆抗体最主要的优点： 特异性强，灵敏度高，并能大量制备。 （二）单克隆抗体的应用： 准确、高效、简易、快速 （如同位素标记单克隆抗体，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等） 癌细胞的细胞膜上存在甲胎蛋白和癌胚等抗原物质。 小知识：单克隆抗体的应用 “生物导弹” ＝单克隆抗体＋药物 （2）治疗疾病和运载药物 主要用于癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。 利用抗原和抗体的特异性结合 单克隆抗体导向， 药物为弹药 2.2单克隆抗体的制备 看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？ (1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠体内的 细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_______类物质。 (2) d过程是一个_____________过程，该过程的进行常用_____________或____________进行诱导。 B淋巴 抗原 细胞融合 聚乙二醇 灭活的病毒 4、看图回答： (3)假设仅考虑细胞两两融合的情况，则可形成____种类型的C细胞，因此需用_______培养基及_________检测阳性筛选出D细胞用于培养，D细胞的名称是 ，其特点是________________________________。 选择性 　 3 既能无限增殖 杂交瘤细胞 专一抗体　 4、看图回答： 又能产生特异性抗体 (4)在培养时通过_____分裂方式大量繁殖。D细胞体外培养需要的条件是：__________