基因的遗传和表达生物化学.pptVIP

四、聚合酶链反应合成目的基因 设计扩增该基因的特异性引物 注意扩增产物要测序分析，防止PCR的错配导致目的基因的改变。 使用高保真Taq酶 尽量减少扩增循环圈数（25圈以内） * 构建差示文库筛选特殊基因 反映不同组织细胞或同一种细胞在不同状态下，基因表达的差异的文库。 也称扣除文库 肝癌与正常肝脏mRNA表达的不同 * * 肝癌细胞 正常肝细胞 提取mRNA 提取mRNA 逆转录cDNA单链 变性、复性 过滤分离去除双链 得到特定基因cDNA单链 * * 3重组DNA技术的意义 填平了生物种属间不可逾越的鸿沟。 缩短了生物进化的时间 使人们能够对生物进行定向改造 * 重组DNA技术与医学、药学的关系 1、生物制药 2、基因诊断 3、基因治疗 4、疾病相关基因的研究 5、遗传病的预防 * 重要的工具酶-----内切酶 1 限制性内切酶 定义：是一类能够识别和切割双链DNA分子中特定碱基顺序的核酸水解酶。 命名：第1字母（大写）产生该酶细菌的属名的第一字母；第2、3字母（小写）细菌的种名；第4字母（大写）细菌菌株名；最后是罗马数字，代表该菌株中发现的第几个酶。 EcoRI，EcoRV BamHI，HinFI * 2 功能 严格识别切割顺序，识别点多为回文结构，识别长度4-8bp，以6bp最常见。 切口2种 （1）平末端 5‘GGCC 3’