基因重组蛋白纯化流程.docVIP

01.11周总结 一、本周工作 01．05 20T—TB23蛋白处理 1、分析昨天20T—TB23蛋白跑小胶的情况，硫胺分析上清基本无目的蛋白，因此放弃处理上清；2、沉淀中目的蛋白比较明显 ，观察小胶2M尿素溶解上清中目的蛋白较少，6M、8M溶解的沉淀中目的蛋白量较少，因此考虑用2M尿素去杂蛋白，用6M尿素洗目的蛋白；3、用正常Buffer将沉淀再洗两遍，用15ml/P Buffer溶液将沉淀吹起，超声2min,12000rpm离心15min,再重复一遍；4、用30ml 2M尿素溶液（含20mmol/L Tris--Hcl）将沉淀吹起，超声2min,12000rpm离心15min，弃上清；5、用15 ml 6M尿素溶液将蛋白吹起，超声2min,冰箱中放置2h，超声2min,12000转离心30min;6、将上清倒至一洗净的烧杯中，取上清测蛋白浓度，往上清中加7.5ml的5*loadingbuffer,取40微升跑粗抗胶，其余放到冰箱等待上大胶；7、将大胶夹好后，用注射器往每板大胶中加3微升样品，进行电泳； 20T— = 1 \* ROMAN I56 = 2 \* ROMAN II12菌体回收 1、该蛋白共两瓶，平均装入3只大离心管中，7000rpm离心3min；2、去上清用20ml裂解液吹起，超声破碎3*4min,观察蛋白溶液显白色，预计为沉淀表达;3、12000rpm离心25mi