重组天花粉蛋白高表达对人宫颈癌Caski细胞p7-中国药理学通报.PDF

·１２９０· 中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１３Ｓｅｐ；２９（９）：１２９０～３ 网络出版时间：２０１３－８－１４１８：１１　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ１８１１．０２６．ｈｔｍｌ 重组天花粉蛋白高表达对人宫颈癌 Ｃａｓｋｉ细胞 ｐ７３基因甲基化影响的机制研究 １ ２ ２ ２ ３ 彭平平 ，黄利鸣 ，韩　钰 ，尤程程 ，方正超 （１．三峡大学第二临床医学院，２．三峡大学医学院，３．宜昌市疾病预防控制中心，湖北 宜昌　４４３０００） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１３．０９．０２６ 发挥维持甲基化的作用。因此推测，降低 ＤＮＭＴ１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１３）０９－１２９０－０４ 的表达，逆转抑癌基因ｐ７３甲基化状态，恢复其正常 中国图书分类号：Ｒ２８２．７１；Ｒ３２９．２４；Ｒ３９４．２；Ｒ７３７３３０２２； 表达，可能成为治疗宫颈癌的手段之一。前期研究 Ｒ９７９２２ 发现，ｒＴＣＳ高表达能够明显抑制 Ｃａｓｋｉ细胞增 摘要：目的　探索重组天花粉蛋白（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｔｒｉｃｈｏｓａｎ ［１１－１２］ 殖 ，本实验将进一步探索ｒＴＣＳ高表达与抑癌 ｔｈｉｎ，ｒＴＣＳ）高表达对人宫颈癌Ｃａｓｋｉ细胞ｐ７３基因甲基化影 基因ｐ７３甲基化的关系及其机制。 响的机制。方法　ＲＴＰＣＲ、ＱＴＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ｒＴＣＳ １　材料与方法 高表达后Ｃａｓｋｉ细胞中ＤＮＡ甲基化转移酶Ｉ（ＤＮＭＴ１）的表 达变化，甲基化特异性ＰＣＲ（ＭＳＰ）法检测ｐ７３基因５′端启动 １．１　试剂及材料　高表达ｒＴＣＳ人宫颈癌Ｃａｓｋｉ细 子区ＣｐＧ岛甲基化状态的改变。结果　宫颈癌 Ｃａｓｋｉ细胞 胞株由三峡大学分子生物研究所提供，分子量标准、 ｐ７３为低表达，其启动子呈部分甲基化状态。高表达 ｒＴＣＳ 工具酶Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司产品；ＰＣＲ引物由上海生物 的细胞株其 ＤＮＭＴ１ｍＲＮＡ及蛋白水平的表达均降低，其中  技术工程有限公司合成；ＳＹＢＲ ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭＲＴ ｍＲＮＡ水平降低０５６倍（Ｐ＜００１），ｐ７３基因启动子甲基化 ＰＣＲＫｉｔ购自大连ＴａＫａＲａ公司；氢醌购自Ｓｉｇｍａ公 程度亦有所降低，ｐ７３ｍＲＮＡ水平表达升高。结论　高表达 司；兔抗人 ＤＮＭＴ１单克隆抗体、Ｓ腺苷蛋氨酸、ＳｓｓＩ ｒＴＣＳ可能通过抑制ＤＮＭＴ１的表达，致使抑癌基因ｐ７３启动 酶均为美国ＮＥＢ公司产品。 子去甲基化而重新表达，最终发挥抑癌基因功能抑制宫颈癌 １．２　高表达ｒＴＣＳ对ＤＮＭＴ１表达的影响 Ｃａｓｋｉ细胞增殖。 １．２．１　细胞培养　高表达ｒＴＣＳ人宫颈癌Ｃａｓｋｉ细 胞株（设为实验组），及转染空载质粒 ｐｃＤＮＡ３１ 关键词：重组天花粉蛋白；宫颈癌；抑癌基因；ＤＮＡ甲基化； （－）细胞株（设为对照组）均培养于３７℃、５％的 甲基化转移酶Ｉ；ｐ７３基因 ＣＯ湿化孵箱中，培养液为ＲＰＭＩ１６４０（＋）（含体积