孕妇艾滋病、梅毒和乙肝检测技术.pptVIP

怎样采集抗凝静脉血DBS 静脉血充分与EDTA混合； 最好采集后立即制备干血斑； 血浆与血细胞分层的全血在制备干血斑前，应轻柔地上下颠倒采血管（避免血细胞破裂），使血液混匀后制备； 用移液枪加代滤芯枪头移取75-80ul血液； 枪头对准印圈的中心缓慢将血液滴于滤纸上； 避免有气泡； 怎样干燥DBS 避免触摸或涂抹血斑； 室温空气中水平干燥（至少4个小时）； 避免阳光直晒； 在干燥过程中不允许加热，叠加或将DBS接触其他表面； 在包装前充分干燥DBS 滤纸片干血斑的包装与运输 将完全干燥的滤纸片干血斑样本用塑料袋进行独立包装，或者用秤量纸隔开，以避免样本之间的污染。 已独立包装好的样本一起放入密封塑料袋中 ，加入几包干燥剂,加入湿度指示卡。 将包装好的滤纸片干血斑，连同相应的文件（如采样/送样单等）放入大信封中。 密封后可邮寄运输。 放入密封袋 加入干燥剂 加入湿度指示卡 标记袋中内容物 核酸检测 2次检测阳性可早期诊断HIV感染，如果不具备条件，也可用HIV病毒载量法来代替，2次检测阳性也可诊断HIV感染，18个月龄以后再做抗体检测确认。 HIV核酸定量检测 通过SFDA审批的试剂盒、方法 NASBA EasyQ Amplicor Taqman bDNA340 440 M2000 PG CD4+T淋巴细胞检测 CD4+T淋巴细胞计数 广泛应用于HIV感染者的临床管理中，协助判断感染者的预后、指导实施抗病毒治疗和疗效观察以及药物预防机会性感染等方面。 CD4+T淋巴细胞检测 对于免疫功能相对较好，CD4+T淋巴细胞计数350/mm3的艾滋病感染孕产妇，采用预防性抗病毒用药方案； 对于CD4+T淋巴细胞计数≤350/mm3的艾滋病感染孕产妇，采用治疗性抗病毒用药方案。 一般筛查方法 酶联免疫吸附试验（ELISA） 化学发光或免疫荧光试验：采用发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果。 快速检测（RT）及其它检测试验 (1)明胶颗粒凝集试验(PA) (2)免疫渗滤试验 (3)免疫层析试验 (1)酶联免疫吸附试验（ELISA） HIV抗体检测试剂：检测HIV-1/2抗体 HIV抗原抗体联合检测试剂：可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体 用酶标仪测定结果 四代艾滋病酶联免疫试剂比较 solid phase specific detection of conjugate 第一代 病毒裂解液 HIV-1 IgG 抗体 HIV-1 -IgG抗体 第二代 病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2 IgG 抗体 HIV-1 / -2 IgG抗体 第三代 病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2 / -O IgM / IgG 抗体 HIV-1 / -2 / -O 病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2 / -O 第四代 病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2 / -O anti-p24 Ab IgM / IgG 抗体 HIV-1 / -2 / -O p24 抗原 病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2 / -O anti-p24 抗体 ELISA酶联免疫吸附实验 ELISA HIV 抗原包被平板 病人抗体 酶 显色剂 + ve - ve 阴性对照 阳性对照 阴性 阳性 质控 酶联免疫吸附试验（ELISA） 优点：准确性高、价格低廉、判断结果标准客观、结果便于记录和保存 用途：流行病学监测及临床大量标本的检测 (2)化学发光或免疫荧光试验 采用发光或荧光底物 既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体 酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物 用发光仪或荧光仪测定结果 全血样品 加50ul样品于样品垫中 手指血方法 静脉血方法 加一滴缓冲液 15分钟内读取结果 （3）快速检测（RT）及其它检测试验 快速检测（RT）及其它检测试验 优点:试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。不需专门设备和人员培训,一般可在10～30分钟内得出结果。 缺点:肉眼判断较主观、价格较贵、结果不易保存。 样　　品 初筛试验 一阴一阳 均阳性反应 报告阴性 确证试验 复检试验 报告阴性 均阴性反应 阳性反应 原有试剂＋另一 不同原理（或厂家） 试剂或另外两种不同 原理（或厂家）试剂 选用筛查试剂 阴性反应 HIV抗体筛查检测流程图 HIV抗体确证试验 确证试验的试剂： 必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。 确证样品： 可采用