脱氧胆酰酪氨酸的避孕药效与阴道黏膜刺激分析.pdfVIP

复旦大学硕士论文…………………………………………脱氧胆酰酪氨酸的避孕药效及阴道黏膜刺激研究 脱氧胆酰酪氨酸的避孕药效及阴道黏膜毒性研究 中文摘要 近年来，性传播已经成为全球艾滋病病毒(HIV)传播的主要途径，其中研 制兼具避孕和预防AIDS／STDs的双功能外用避孕药特别适合我国国情。脱氧胆 的基础上，对侧链部位用氨基酸进行了结构修饰，合成了新的胆酸衍生物。 本研究通过避孕药效学、杀精机制研究、阴道粘膜刺激性研究，对于DCT 的成药性初步进行了有效性和安全性的评价，也初步探讨了DCT作为外用避孕 药的杀精机制。 避孕药效学研究包括体外杀精试验、体内杀精试验与抗生育避孕试验。体外 杀精试验将DCT与人类体外精子充分混合作用，观察精子活率随着DCT浓度及 时间的变化，即剂量时间效应试验，并同时得出精子的运动参数的变化情况。然 后去除DCT作用观察精子活力恢复情况。结果显示DCT的杀精效果具有明显的 剂量．时间效应，对精子运动活力参数和精子运动方式参数均有抑制作用，在去 除药物作用后精子活率没有明显改变(尸0．05)。 体内杀精试验和家兔避孕试验选用发情期雌兔60只，随机分成6组，阴道 min、10min、 内给药，10min后与生育能力正常的雄兔1：1进行交配。在交配后5 15 min和20min从阴道取出精液显微镜下观察精子活动情况。结果显示DCT gel 在单次阴道给予12．50 DCT剂量时，交配后5min内均未见活动 mg和25．00mg 精子。体内杀精试验约60min后，上述各组家兔阴道给予同样的受试物，10-15 min后再与雄兔进行1：1交配，记录产仔兔情况，并计算出避孕率。结果显示， 中、高剂量组家兔达到100％的抗生育避孕效果。 杀精机制研究包括质膜完整性试验、凋亡试验、顶体试验、线粒体试验以及 利用扫描电镜观察精子结构等。利用荧光染料SYBR．14／PI与荧光显微镜及流式 细胞仪相结合定性和定量观察DCT对精子质膜的影响。结果显示DCT可以明显 0．25、0．5和1．0 破坏精子质膜，质膜完整精子在DCT mg／ml时质膜完整精子比 具有明显差别(P0．05)，且具有明显的剂量效应关系。荧光显微镜结合 FITC．PSA／PI双染观察精子顶体影响，结果显示，DCT处理后精子顶体区染色暗 淡切不均匀，或者根本没有荧光染色，可见DCT对于精子顶体具有明显的破坏 作用。利用荧光染料JC．1与荧光显微镜及流式细胞仪相结合定性和定量观察 DCT对精子线粒体膜电位的影响。结果显示，DCT处理后精子线粒体膜电位发 万方数据 复旦大学硕士论文…………………………………………脱氧胆酰酪氨酸的避孕药效及阴道黏膜刺激研究 生改变，精子尾部绿色荧光强度明显增强。FCM结果显示精子线粒体膜电位随 着DCT浓度的升高而逐渐下降，正常线粒体膜电位精子比例与空白对照组有明 剂量依赖性(尸O．05)。DCT_0．5 g·L。1引起精子早期凋亡率升高，但是高浓度时 却出现降低趋势。电镜结果显示DCT处理后大部分精子的顶体脱失，质膜不完 整，被溶解、破坏；尾部出现穿孔甚至断裂。 阴道黏膜刺激性试验选用成年雌性小型猪9只，随机分为3组，分别为基质 连续7天，给药前和末次给药后24h、72h收集阴道灌流液，取沉淀细胞用流式 细胞仪检测炎症细胞及CD45+细胞比例。末次给药后72h处死动物，切开阴道进 行肉眼观察，然后分离出阴道组织，分别