实验四甘油三酯测定.pptVIP

测量误差:是测量结果减真值之差。 误差和准确度属于不同概念，两者之间不能划等号。 不准确度的数字表达是不确定度 (标准差和置信区间的半宽度表示)。 可以理解为测量结果与约定真值之差的范围。 生化分析相关概念 正确度 大量测量的均值与真值的接近程度。用偏倚表示不正确度 。 偏倚值(Bias=Xi-x), 生化分析相关概念 精密度：表示测量结果中的随机误差大小的程度，即指在一定条件下进行多次测定时，所得结果之间的符合程度。 常用标准差或变异系数表示。 生化分析相关概念 实验方法分类 ①决定性方法（definitive method） 实验目的: 1.掌握酶法测定血清中三酰甘油的原理和意义． 2.了解三酰甘油的正常值范围. TG的生物化学 二 TG又称中性脂肪，由3分子脂肪酸和1分子甘油酯化而成，是体内能量的主要来源。TG处于脂蛋白的核心，在血中以脂蛋白形式运输。 TG的代谢 外源性途径 内源性途径 外源性途径： 指食物中的TG在小肠内水解成脂肪酸和甘油一酯、二酯后由肠粘膜吸收入细胞，再合成TG并与其他脂质形成CM，通过淋巴系统入血。CM中的TG在脂蛋白脂肪酶（LPL）作用下水解为甘油和游离脂肪酸（FFA），被细胞利用或贮存。 内源性途径： CM水解产物—CM残粒以受体介导的形式被肝脏吸收，其衍生物和一些新组分合成VLDL。 TG测定的方法学 化学法 色谱法 酶法 化学法 化学法用有机溶剂氯仿抽提标本中的TG，去除抽提液中磷脂等干扰物后，用碱水解（皂化）TG，以过碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用显色反应测甲醛。但因操作步骤繁多、技术要求高、不能自动化，而不适于常规工作应用。 化学法 1.Van Handel-Caslson法（二氯甲烷-硅酸-变色酸法） 比较准确 2.分溶抽提-乙酰丙酮显色法 比较简便， 条件温和，但灵敏度低 基本步骤：抽提、皂化、氧化、显色 色谱法 核素稀释/气相色谱/质谱技术（ID/GC/MS）主要用作参考系统中决定性方法的建立及参考物质的制备与定值，此法费用昂贵，样品处理复杂，难以推广应用。 酶法 1.磷酸甘油氧化酶法 最为普遍使用 酶试剂稳定，灵敏度高，线性范围宽 2.乳酸脱氢酶法 结果准确，但灵敏度低， 试剂不太稳定 3.甘油氧化酶法 实验操作(手工分析）: 加入物 空白管 标准管 样本管 蒸馏水（ul） 20 —— —— 标准液 （ul） —— 20 —— 样本 （ul） —— —— 20 酶工作液（ml) 1.5 1.5 1.5 混匀，37℃孵育15min，以空白管调零，520nm波长处测定各管吸光度值(A)。 酶工作液 试剂1（稀释液） 过氧化物酶 EDTA 4-氨基安替比林 缓冲剂 试剂2（酶试剂） 脂蛋白脂酶 ATP EDTA 甘油激酶 甘油磷酸氧化酶 3，5-二氯-2-羟基苯 磺酸盐 Mg2+ 实验操作(自动分析） 空白管 校准管 质控管 样本管 试剂1 （ul） 240 240 240 240 蒸馏水（ul） 3 —— —— —— 标准液 （ul） —— 3 —— —— 质控液 （ul） —— —— 3 —— 样本（ul） —— —— —— 3 混匀，37℃孵育5min 试剂2（ul） 60 60 60 60 混匀，37℃孵育5min，以空白管调零，520nm波长处测定各管吸光度值(A)。 注意要点： 1．酶试剂发红时，不可再用。　 2．加入显色剂要准确，加入后立即混匀。 3. 线性范围上限为11.4 mmol/L ，若超过用生理盐水稀释。　　　　　　　　　　　　　 血清TG参考范围：