实验[1]蒽酮比色定糖法.pptVIP

实验三：蒽酮比色定糖法 一、实验目的 学习分光光度法的基本原理 学习对蔬菜和食品中糖含量进行测定的方法 二、实验原理 分光光度法基本原理： 溶液中的物质在光的照射激发下，产生对光的吸收效应，不同的物质具有各自选择性的吸收光谱，因此，当某单色光通过溶液时，能量会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质浓度有一定比例关系，即符合于比色原理——比尔定律 朗伯-比尔定律 A=lg(1/T)=Kbc A：为吸光度, T：为透射比,是投射光强度比上入射光强度 c：为吸光物质的浓度 b：为吸收层厚度 物理意义：是当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的西光物质时,起其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比. 二、实验原理 蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基，戊醛糖及己糖醛酸反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。 蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。对于特定的糖类，反应较稳定。 本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄糖含量。 三，实验试剂 蒽酮试剂：取0.2g蒽酮溶于100mL 80%(V/V)硫酸中，当日配制使用； 标准葡萄糖 溶液(0.1mg/mL)： (可滴加几滴甲苯作防腐剂)； 糖样品溶液。 四 、实验操作步骤 1. 制作标准曲线： 取干试管6支，依次加入标准糖溶液 0，0.1，0.2，0.3mL,0.4ml，0.5ml,并依次用蒸馏水补足体积到1mL，各管均加入蒽酮试剂4mL，震摇混匀。沸水浴准确煮沸10 min，室温放置10min，用1号试管溶液调零，比色测定A620（同时测定样品）。用标准糖溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，制作标准曲线。 2. 样品含糖量测定：无蛋白糖溶液样品溶液稀释100倍，吸取1mL置试管中，再加入4mL蒽酮 试剂，沸水浴中煮沸10分钟，取出后冷却10min后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。 计算： 样品糖含量(mg/ml) 五、实验结果 六、结果讨论： 1，分光光度法（比色法）的原理 2，水果中糖的提取方法