实验一 光学显微镜构造及使用.ppt

DIC滑行器（U-DICT），上附检偏器（U-ANT或U-AN） 棱镜控制旋钮 DIC显微镜下的硅藻 七）荧光显微镜 1． 短波光照射样品导致荧光分子被激发，分子能级跃迁，以光子的形式释放能量。 2． 光源：高压汞灯，使用时需要预热十五分钟，断电后十分钟内不能重启。 3． 滤色镜：包括激发光滤镜和阻断滤镜。 4． 汞灯使用前需聚焦调中。 激发模块 紫外防护罩 汞 灯 汞灯调中检验器 ① 为了延长高压汞灯的使用寿命，一旦启动，不能在少于15分钟内关闭。关闭高压汞灯后，至少10分钟后才能再次启动。 ② 转动转盘或插入滤光片时始终要停在听到卡嗒声处。如果偏离这个位置，遮光板会由于过热而变形。 荧光显微调节装置 荧光显微镜使用注意事项 1. 紫外光有害，注意保护眼、皮肤 2. 荧光弱，曝光时间长，需注意防震 3. 保护标本，避免长时间曝光对标本的照射 4. 标本制作过程中要注意清洁、环境干净 5. 暗室条件 八) 电子显微镜 电子显微镜与光学显微镜的成像原理基本一样，所不同的是用电子束作照明源，用电磁场作透镜，放大倍数最高可达近百万倍。另外，由于电子束的穿透力很弱，因此用于电镜的标本须制成厚度约50nm左右的超薄切片。 透射电子显微镜 实验报告 简要阐述光学显微镜各种显微功能的光路原理和调节使用方法； 各种光学显微镜的使用注意事项。 实验一、光学显微镜构造和使用 细胞生物学实验规则： 保持实验室和实验台面的整洁； 保持安静有序的实验秩序； 规范操作，爱护仪器设备； 不随意动用不必要的仪器设备，更不可在不懂操作规程的情况下或不按规范使用仪器设备； 实验结束后认真、完整地填写“仪器设备使用记录”，仪器运行出现异常或损坏要及时报告老师，不可私自拆装仪器； 鼓励提出实验设计或操作的改进意见； 独立完成实验报告。 本学期细胞生物学实验开设项目和时间安排 序号 项目名称 学时 性质 01 显微技术总论（光学显微镜构造及使用） 6 综合性 02 叶绿体的提取分离和荧光观察 3 综合性 03 细胞器的超活染色技术 3 验证性 04 哺乳类红细胞综合实验（细胞凝集和低渗溶血） 3 验证性 05 巨噬细胞吞噬现象观察 3 验证性 06 植物染色体标本制作和组型分析 6 综合性 07 动物染色体标本制作技术 3 综合性 08 动物细胞微丝束的光学显微观察 6 综合性 09 染色体核仁组织区的银染色法 3 验证性 10 鸡红细胞融合实验 3 验证性 11 生物制片技术 6 综合性 光学显微镜构造和使用 一、实验目的 1． 了解和掌握普通光镜、暗视场显微镜、相差、荧光、微分干涉差、倒置等显微镜的原理和使用方法。同时简单介绍电镜原理。 2． 了解掌握光学显微镜的光路合轴方法，了解显微摄影的基本操作。 二、原理和方法 一）普通（明场）光学显微镜 1． 普通明场光学显微镜各零部件构成：镜座、柱、筒、臂、转换器、载物台、调节器、光源及光源聚光镜，视场光阑、孔径光阑、镜台下聚光器、聚光器前透镜、物镜和目镜。 2． 物镜的种类：消色差物镜、复消色差物镜、平场物镜。 3． 显微镜的光路原理（略） 光源色光→视场光阑—折射→孔径光阑→聚光镜→样品在物镜后焦平面成像→目镜观察 4． 显微性能参数 显微镜的性能参数包括分辨率、放大率，焦点深度、视场宽度等。 1）分辨率：R=0.61λ /N.A.； N.A.＝ｎsinα/2 式中：n=介质折射率；α=孔径角（镜口角，物镜最边缘斜光线与显微镜光轴所成的交角），N.A.=数值孔径（镜口率，numeric aperture）。镜口角总是要小于180?，所以sina/2的最大值必然小于1。 2）显微镜总放大率（Mt）=物镜放大率×目镜放大率×摄影透镜放大率； 有效放大率 = 物镜数值孔径的500-1000倍，故需根据物镜选配适宜的目镜。 5． 显微镜的使用 1）光路合轴：镜检与摄影前，使照明光线与显微镜光轴合一即为光路合轴，整个过程涉及到聚光器调中和光源灯丝调中两部分，详细过程参阅教材。 2）光阑的调节：视场光阑用于控制照明光束可以限定视场大小；孔径光阑用于限定聚光器孔径大小。调节时以视场光阑内缘外切孔径光阑为基准。 3）各种特殊光学构件的安装、调试和使用（以BX-50系统显微镜为例） OLYMPUS BX 50系统显微镜组成部分 OLYMPUS BX 50 光强预置旋钮 粗细准焦旋钮 激发模块 万能聚光镜 孔径光栏拉杆 万能聚光镜 视场光阑调节环 光路合轴调中 ① 转动聚光镜高度升降旋钮把聚光镜升高到最高位置； ② 放入样品，将DIC、起偏器等光学附件移出光路，聚光镜转到明场上； ③ 用4X或10X物镜聚焦，调至清晰； ④ 视场光阑打至最小； ⑤ 通过调节聚光镜升降旋钮下降聚光镜，使视场中出现清晰正多边形图像；