瘤背石磺肌球蛋白重链MyHC基因的克隆与表达分析-渔业科学进展.pdf

第39 卷 第4 期 渔 业 科 学 进 展 Vol.39, No.4 2 0 1 8 年 8 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Aug., 2018 DOI: 10.19663/j.issn2095-9869.20180130001 / 顾冰宁, 刘欣, 沈和定, 王冬凤, 杨铁柱, 朱敏, 史艳梅, 李柏航. 瘤背石磺肌球蛋白重链(MyHC)基因的克隆与表达分析. 渔业科学进展, 2018, 39(4): 126–138 Gu BN, Liu X, Shen HD, Wang DF, Yang TZ, Zhu M, Shi YM, Li BH. Molecular cloning and analysis of the MyHC gene in Onchidium struma. Progress in Fishery Sciences, 2018, 39(4): 126–138 瘤背石磺肌球蛋白重链(MyHC)基因的 克隆与表达分析* # # ① 顾冰宁 刘 欣 沈和定 王冬凤 杨铁柱 朱 敏 史艳梅 李柏航 (上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室 水产科学国家级实验教学示范中心 海洋动物系统分类与进化上海高校重点实验室 上海 201306) 摘要 肌球蛋白是动物体内重要的功能性马达蛋白，调控机体的信号传导、肌肉收缩和细胞器运 动，为探究肌肉在瘤背石磺(Onchidium struma) 由海洋向陆地进化过程中发挥作用的分子机制，实验 以石磺科4 种贝类转录组数据为基础，采用RACE 方法从瘤背石磺肌肉中首次克隆到肌球蛋白重 链(Myosin heavy chain, MyHC)基因cDNA 的全长并进行组织表达分析。研究结果显示，瘤背石磺 MyHC 基因cDNA 全长为7566 bp ，包括5895 bp 的开放阅读框，228 bp 的5端非翻译区，1443 bp 的3端非翻译区，共编码 1964 个氨基酸。预测该基因编码的蛋白质由31713 个原子组成，分子式 为C H N O S ，分子量约为225.28 kDa ，理论等电点为5.56 ，N 端信号肽具有29 个氨 9765 15897 2849 3150 52 基酸长度。瘤背石磺MyHC 具有2 个保守结构域MYSc_class_ Ⅱ和Myosin_tail_l ，且亲水性氨基酸 集中在Myosin_tail_l 区。系统进化树分析显示，瘤背石磺MyHC 与光滑双脐螺(Biomphalaria glabrata) MyHC 的亲缘关系最近。RT-PCR 结果显示，MyHC 基因在各个组织中均有表达，腹足和背部皮肤 表达量最高，腹部皮肤、口球、肺囊中高表达，肝胰腺、蛋白腺、两性腺中微量表达(P0.05) 。MyHC 基因在瘤背石磺的主要运动器官腹足中高表达，说明肌肉运动对瘤背石磺湿地环境的两栖适应性具 有至关重要的作用。实验结果为今后进一步研究瘤背石磺肌球蛋白重链基因进行原核表达及多克隆 抗体的制备奠定了良好基础，更为深入探讨海洋无脊椎动物从海洋向陆地进化的研究提供有参考意 义的分子依据。 关键词 瘤背石磺；MyHC ；基因克隆；组织表达 中图分类号 S917.4 文献标识码 A 文章编号 2095-9869(2018)04-0126-13 瘤背石磺(Onchidium struma) 是生活在潮间带 石磺科(Onchidioidea) ，是一种具有重要营养价值和药 高潮区滩涂的一种肺螺类，隶属于软体动物门 用价值的两栖性贝类，广泛分布于赤道两侧的热带和 (Mollusca)、腹足纲(Gastropod