益母草糖基转移酶基因的克隆及原核表达分析.pdf

植物科学学报　 ２０１６ꎬ３４(３):３９７~４０５ Ｐｌａｎｔ ＳｃｉｅｎｃｅＪｏｕｒｎａｌ ｈｔｔｐ:// ｗｗｗ.ｐｌａｎｔｓｃｉｅｎｃｅ.ｃｎ － ＤＯＩ:１０１１９１３/ ＰＳＪ２０９５ ０８３７２０１６７０００１ － 徐德宏ꎬ谭朝阳.益母草糖基转移酶基因的克隆及原核表达分析[Ｊ].植物科学学报ꎬ２０１６ꎬＤＯＩ:１０１１９１３/ ＰＳＪ２０９５ ０８３７２０１６７０００１ ＸＵ ＤＨꎬＴＡＮＣＹ.Ｇｅｎｅ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｆｒｏｍ Ｌｅｏｎｕｒｕｓ ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌｕｓ Ｓｗｅｅｔ[Ｊ]. Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ － Ｊｏｕｒｎａｌꎬ２０１６ꎬＤＯＩ:１０１１９１３/ ＰＳＪ２０９５ ０８３７２０１６７０００１ 益母草糖基转移酶基因的克隆及原核表达分析 徐德宏ꎬ 谭朝阳∗ (湖南中医药大学药学院生物工程实验室ꎬ 长沙 ４１０２０８) 摘　 要: 通过 ｃＤＮＡ 末端快速扩增技术(ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄｓꎬ ＲＡＣＥ)从益母草(Ｌｅｏｎｕｒｕｓ ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌｕｓＳｗｅｅｔ)叶片中克隆获得了一个编码糖基转移酶的基因(ＬｈｓＵＧＴ)ꎮ 该基因ｃＤＮＡ全长为 １５６２ ｂｐꎬ 开放阅读框(ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅꎬ ＯＲＦ)为 １３６８ ｂｐꎬ 编码 ４５５ 个氨基酸残基ꎬ 其分子量和等电点分别为 ５０４７ ｋＤ和５５２ꎮ 生物信息学分析结果显示: ＬｈｓＵＧＴ编码的酶蛋白含有 ３ 种二级结构ꎬ 其中α 螺旋占 ４３１％ꎬ β折叠片占 １７５％ꎬ 无规卷曲占３９４％ꎬ 其 Ｃ 端还发现了一段高度保守的 ＰＳＰＧ 结构域ꎬ 说明 ＬｈｓＵＧＴ编码的酶蛋白属于植物糖基转移酶超家族ꎻ 对 ＬｈｓＵＧＴ 的氨基酸序列进行 ＢＬＡＳＴ 同源比对ꎬ 发现益母 草与其它植物的糖基转移酶序列相似性为２６４％~６８０％ꎻ 系统进化树分析表明ꎬ ＬｈｓＵＧＴ蛋白属于拟南芥糖 基转移酶超家族的Ｌ组ꎬ 故推测它可能具有催化简单酚类发生糖基化的功能ꎻ ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ 电泳显示ꎬ 原核表达 系统成功表达出分子量约为６９ ｋＤ的ＬｈｓＵＧＴ重组蛋白ꎬ 其Ｎ端含有一段１７９ ｋＤ的Ｈｉｓ标签ꎬ 且在ＩＰＴＧ诱导 ５ ｈ后达到最高表达量ꎮ 本研究结果为进一步开展体外酶促反应、 阐明益母草糖基转移酶的生物学功能奠定了 基础ꎮ 关键词:益母草ꎻ 糖基转移酶基因ꎻ ｃＤＮＡ克隆ꎻ 生物信息学分析ꎻ 原核表达 中图分类号:Ｑ９４３　 　 　 　 　 文献标识码:Ａ　 　 　 　 　 文章编号:２０９５￣０８３７(２０１６)０３￣０３９７￣０９ Ｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｆｒｏｍ Ｌｅｏｎｕｒｕｓ ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌｕｓ Ｓｗｅｅｔ ＸＵ Ｄｅ￣ＨｏｎｇꎬＴＡＮＣｈａｏ￣Ｙａｎｇ∗ (Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇꎬＣｏｌｌｅｇｅ ｏｆ ＰｈａｒｍａｃｙꎬＨｕｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＣｈａｎｇｓｈａ４１０２０８ꎬＣｈｉｎａ) Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ａ ｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｇｅｎｅ (ＬｈｓＵＧＴ) ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ｆｒｏｍ Ｌｅｏｎｕｒｕｓ ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌｕｓ Ｓｗｅｅｔ ｕｓｉｎｇ ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ (ＲＡＣＥ).Ｔｈｅ