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绪论 为什么说生物分离过程往往成本高？ 答：①在粗产物中，被提取物浓度通常很低；②需处理的物料往往是成分比较复杂的多相体系；③对于生物制品往往要求纯度高、无色、结晶以及能长期保存等因此，使得生物分离过程往往成本很高。 以发酵液为例，简述生化分离的一般工艺过程？ 选择下游加工工艺的原则： ①是胞内产物还是胞外产物；②原料中产物和主要杂质的浓度；③产物和主要杂质的物理化学性质及其性能差异；④产品用途及质量标准；⑤产品的市场价格，涉及能源、辅助材料的消耗水平；⑥污染物的排放量及处理方式 产品提取的工艺步骤为何越少越好？为何要重复提取？ 因为下游分离技术步骤越多，提取收率越低，比如整个下游过程包括 6 步操作，每步回收率高达 95%，经过 6 步操作之后，总收率也只有 73.5%，因此尽量减少分离提取的操作步骤，有利于提高产物总收率。 重复提取的目的是为了提高产物的总收率。如一步等电结晶提取谷氨酸的收率为 78%， 结晶母液如果进行重复提取，二次重复提取收率也为 75%，则总收率为 78%+（1-78%）× 75%=94.5%。 第二章 过滤 什么是助滤剂？在固液分离操作过程中，如何选择助滤剂？ 助滤剂是一种具有特殊性能的细粉或纤维；它能使某些难以过滤的物料变得容易过滤。 助滤剂的选择要点：①粒度选择：根据料液中的颗粒和率出液的澄清度来确定。当粒度一定时，过滤速率与澄清度成反比，过滤速率小，澄清度好，故颗粒较小时，应采用细的助滤剂。 ②根据过滤介质和过滤情况选择助滤剂的品种：如使用粗目滤网时易泄露，可加入石棉粉或纤维素，可有效防止泄露；③用量选择：间歇操作时助滤剂预涂层的最小厚度是 2mm；在连续操作时根据所需过滤速率来确定。 为什么要进行发酵液的预处理？ 改变发酵液的物理性质，提高从悬浮液中分离固形物的速率，提高固液分离的效率； 尽可能使产物转入便于后处理的某一相中 去除发酵液中部分杂质，有利于后续各步操作 发酵液的预处理技术方法 物理性质的改善：加热（降低黏度，去除杂蛋白，调节悬浮液的PH值）；凝聚与絮凝（增大粒度）；加助滤剂（改善过滤）。杂质的去除：去杂蛋白（沉淀、变性、吸附）；去多糖（酶解）；去离子（沉淀）。 改善过滤的方法 降低粘度；（2）增大悬浮颗粒体积；（3）加助滤剂；（4）操作条件的改变 书本 P21 第 1 题 第三章 离心与沉降 1. 书P23 例 3-1 2. 书P30 例 3-3 3. 书P30 例 3-4 影响离心机处理能力的因素 ①处理样品的特性，如密度、粒径等；②溶液的特性，如密度、粘度等；③离心机机械结构，如 r1 和 r2；④操作条件，ω 细胞破碎 常见的细胞破碎技术有哪些？ 化学法：渗透冲击、酶消化法、增溶法、脂溶法、碱处理 机械法：匀浆法（片型）、研磨法、超声波法、匀浆法（孔型）、珠磨破碎 02.酶解法细胞破碎的优缺点： 优点：发生酶解的条件温和；能选择性的释放产物；胞内核酸等泄出量少，细胞外形较完整。 缺点：溶酶价格高；溶酶法通用性差（不同酶种需选择不同的酶）；产物抑制的存在。 03.不宜使用高压匀浆法的范围 易造成堵塞的团状或丝状真菌， 较小的革兰氏阳性菌， 含有包含体的基因工程菌（因包含体坚硬，易损伤匀浆阀） 04.机械法和非机械法破碎的比较： 比较项目 机械法 非机械法 破碎机理 切碎细胞 溶解局部壁，膜 碎片大小 碎片细小 细胞碎片较大 内含物释放 全部 部分 粘度 高（核酸多） 低（核酸少） 时间，效率 时间短，效率高 时间长，效率低 设备 需专用设备 不需专用设备 通用性 强 差（专一性强） 经济 成本低 成本高 应用范围 工业规模，实验室 实验室，部分工业 05.在选择细胞破碎方法时需要考虑哪些因素？ 细胞处理量；细胞壁强度和结构(高聚物交联程度、种类和壁厚度)；目标产物对破碎条件的敏感性；破碎程度；目标产物的选择性释。 第五章 膜分离 影响