植物细胞工程试验指导.pdf

. 植物细胞工程实验指导 编者 刘清波 黄红梅 主审 周朴华 湖南农业大学植物科学实验教学中心 二○○七年七月 前 言 细胞工程是生物技术的主要内容之一，涉及的内容较广 ，主要包括： 细胞培养、细胞融合、细胞拆合、生殖细胞、细胞转化等细胞水平的操作和 技术。目的是改良生物品种、生产生物产品或组分。 细胞工程依研究对象不同，分为植物细胞工程和动物细胞工程。两者在 研究内容及深度上已有较大的差别，最重要的差别是细胞全能性的表现。植 物细胞全能性已完全得到证实和发展，即培养一个植物活细胞可以得到胚状 体以至得到完整植株，并且每一个植物活细胞都具有该物种的生命属性，在 合适的离体条件下，这些特征属性均 表现出来。动物细胞全能性证实工作 直到1997 年克隆羊“多莉”的培养成功才获得了阶段性突破。 细胞组织离体培养技术是细胞工程的基础技术和基本技能，也是基因工 程、遗传工程等生命科学研究的重要手段。它是通过无菌操作，把不同的操 作对象，如细胞、组织、器官等外植体接种于人工配制的培养基，给予人工 控制的环境条件，使培育对象表现生命特征。 本实验指导侧重于植物细胞组织培养技术，内容分为10 个实验。主要训 练学生掌握植物细胞组织培养基本技能和操作要领，实验方法立足于初学者 的专业基础和一般实验 的条件，将《细胞工程》课程的理论知识、一般的 实验技能和科学研究的初步方法融为一体。培养学生理论联系实际、独立思 考及实践动手能力。 本实验指导供生物技术、生物工程等专业学生使用。由于编者水平有限， 加之时间仓促，错误在所难免，敬请各位师生批评指正。 编 者 2007 ．7 2 目 录 实验一 培养基母液配制……………………………………………3 实验二 培养基配制与灭菌…………………………………………7 实验三 植物器官愈伤组织的诱导…………………………………9 实验四 植物愈伤组织增殖…………………………………………12 实验五 植物愈伤组织分化…………………………………………14 实验六 植物器官型快速繁殖培养…………………………………16 实验七 花药培养及花粉发育时期的鉴定…………………………18 实验八 植物茎尖培养 ……………………………………………21 实验九 悬浮细胞培养 ……………………………………………23 实验十 原生质体培养 ……………………………………………26 植 物 细 胞 组 织 培 养 植物细胞组织培养是 60 年代以来植物细胞生物学中发展起 来的一项生物技术。它是借用无菌操作方法，培养植物的离体器 官、组织或细胞，使其在人工合成的培养基上，通过细胞的分裂、 增殖、分化、发育，最终长成完整再生植株的过程。 植物细胞组织培养技术的研究，不仅具有重大的理论意义， 而且在生产实践中也已显示了广阔的应用前 。例如，组织分化 与形态建成问题，快速繁殖与去除病毒，花药培养与单倍体育种、 幼胚培养与试管受精，抗性突变体的筛选与体细胞无性系变异， 悬浮细胞培养与次生物质生产以及超低温种质保存等方面的深 入研究和实际应用，都必须借助植物细胞组织培养技术的基本程 序和方法。此外，植物细胞组织培养技术也有助于我们深刻理解 植物细胞的全能性。