移液器的使用及注意事项.pptx

移液器的使用及注意事项 移液器的基本结构 量程范围：在给定的有效量程范围内最小及最大的容量。 常见品牌： Gilson； Eppendorf； Thermo； BioHit（芬兰百得）；大龙（dragon） 移液器的使用 实验要求无菌操作时，应选择可消毒灭菌的移液器，若移液器不能进行蒸汽消毒，则应采取酒精和紫外消毒，枪头应一并消毒。 量程：单道（0.1-1、0.5-10、2-20、5-50、10-100、20-200、100-1000、500-5000µl） 移液器只能在特定量程范围内准确移取液体，如超出最低或最大量程，会损坏移液器并导致计量不准。 冷藏的样品应提前从冰箱拿出室温放置，使温度与室温平衡。 液体温度吸头，移取的液体体积会偏大 液体温度吸头，移取的液体体积会偏小 若溶剂瓶中液体太少，请倒入EP管中，方便吸取。 粗调：通过调节旋钮将容量值迅速调整至接近自己的预想值； 细调：当容量值接近设定值以后，应将移液器刻度显示窗平行放至自己的眼前，通过调节旋钮慢慢地将容量值调至预想值，从而避免视觉误差所造成的影响； 注意事项：在调节量程时，如果要从大体积调为小体积，则按照正常的调节方法，旋转旋钮即可。但如果要从小体积调为大体积时，则应先旋转刻度旋钮至超过量程的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证量取的最高精确度。 将移液器杆垂直插入吸头，左右微微转动，上紧即可。 切记用力不可过猛，更不能采取跺枪头的方法来进行安装。否则会导致内部零部件松散，甚至会导致调节刻度的旋钮卡住。 预洗枪头：在安装了新的枪头或增大了容量值以后，应该把需要转移的液体吸取、排放两到三次，确保移液工作的精度和准度。 先将四指并拢握住移液器上部，用拇指按住杆顶端的按钮，向下按到第一止点，再将吸头垂直浸入液面2~3mm，缓慢平稳松开按钮，吸取液体，并停留1～2秒钟（粘性大的溶液可加长停留时间）。 一般液体，正向吸液（吸液按第一止点 排液终止点）。 粘稠液体和易挥发液体，反向吸液（吸液按终止点  排液第一止点 ），补偿吸头内部的表面吸附。 正向吸液 反向吸液 慢吸慢放，太快会产生反冲和气泡 将枪头贴到容器内壁并保持10-40°倾斜。 平稳地把按钮压到第一止点，停约一秒钟后终止点，排出剩余液体。 排放致密或粘稠液体时，按第一止点，多停留两秒钟 终止点。 压住按钮，同时提起移液器，使枪头贴容器壁擦过后松开按钮。 按卸枪头按钮除去枪头。（只有改用不同液体时才需更换枪头）。 调至最大量程 移液器长时间不用时将刻度调至最大量程，让弹簧恢复原形，延长移液器的使用寿命。 移液器使用完毕应挂回枪架上。当移液器枪头内有液体时，严禁将移液器水平或倒置放置，以防液体流入活塞室腐蚀移液器活塞！ √ × 使用注意事项 1、正确选择枪头 当某一枪头的吸液容量为最大量程的 10% 至100% 时，可在 35% 至 100% 这一实现较高精确度 2、入液角度选择 使入液角尽可能地接近垂直，否则垂直液柱较小，将会吸入过多样品。排液时，枪头应当与容器壁保持较小角度，从而确保良好的排液效果。 移液器容量 入液深度 2 与 10µl 1mm 20 与 100µl 2-3mm 200 与 1000µl 3-6mm 5000µl 与 10ML 6-10mm 3、排液技法 在排液时将枪头末端贴靠容器壁，可减少或者消除排液后残留的样品。沿壁向上滑动枪头末端将移液器撤下，去除枪头孔处的任何残留液滴。 4、枪头入液深度 如入液过深，则因压力加大，吸液量增多；如果入液太浅，则会造成空气进入，产生气泡以及导致容量不准确。正确的入液深度可使准确度提高达 5%。 使用注意事项 5、枪头入液时间 在将样品吸入枪头时，在样品中的入液时间是良好移液技法中的关键因素。在平稳松开按钮之后，必须进行短暂暂停，然后再从样品中取出，以确保将全量样品吸入吸头中。如果量较大以及对于粘性物质而言，必须停留较长时间后再取出，因为移液器中的气室需要一秒钟的时间才能实现均衡。 6、吸液速率 移液器的吸液速率不尽相同，因此会对结果的精度与准确度产生影响。应使用以一种平稳并且受控的方式释放移液器按钮。释放过快可能出现的最常见后果是：气雾会进入移液器杆中，从而损坏移液器的内部部件。 常见的错误操作 1、吸液时，移液器本身倾斜，导致移液不准确。 （应该垂直吸液，慢吸慢放） 2、装配吸头时，用力过猛，导致吸头难以脱卸。 （无需用力过猛，选择与移液器匹配的吸头） 3、平放带有残余液体吸头的移液器。 （应将移液器挂在移液器架上） 4、用大量程的移液器移取小体积样品。 （应该选择合适量程范围的移液器） 5、直接按到终止点吸液。 （应该按照标准方法操