4组织芯片 and 细胞芯片.pptx

组 织 芯 片; 组织芯片(tissue chip) 又称组织微阵列(tissue microarray) 技术, 是由Kononen 等于1998 年首先建立并报道, 一般是将数十至上百个甚至更多小的组织整齐有序地排列在一张载玻片上而制成缩微组织芯片, 即组织切片。 ;组织芯片技术的特点;组织芯片技术的应用;二、组织芯片在肿瘤研究的应用;方法 用组织微阵列技术构建包含51例胰腺癌, 6例慢性胰腺炎患者, 3例正常胰腺组织的60点阵的石蜡组织芯片。用免疫组化SP法检测该芯片中钙结合蛋白的表达, 分析其与胰腺癌临床病理因素的关系?? ;钙周期蛋白与胰腺癌发生、 发展有密切关系, 胰腺癌早期即发现有钙周期蛋白表达, 对胰腺癌的早期诊断有益;2.组织芯片在肿瘤分类中的应用 不同分类的肿瘤由于其组织学类型和肿瘤细胞功能状态及其特异性受体的不同, 治疗方案、疗效及预后均不同。 例：组织芯片用于乳腺癌分类 方法：利用组织芯片技术分析乳腺癌雌激素受体 (ER) 、血管内皮生长因子 (VEGF) 、环氧化酶2、p53、血小板源性生长因子、c-erbB2及PR等肿瘤标志物免疫组织化学表达谱 目的：指导不同类型乳腺癌的个体化治疗及判断预后等方面;Tissue microarray (TMA) for immunohistochemical analysis;Differential expression of seven biomarkers in ER-negative (A) and ER-positive groups (B);3.组织芯片在肿瘤的浸润转移研究中的应用 例：KAI1/CD82蛋白表达与肝细胞癌侵袭转移 方法：构建肝癌组织芯片, 收集肝细胞癌及癌旁肝组织 155例；应用免疫组织化学方法检测肝癌组织芯片中样本KAI1/CD82蛋白的表达 结果：不伴有肝外转移、肝内转移肝细胞癌中KAI1/CD82蛋白表达率分别高于伴有肝外转移、肝内转移者;4.组织芯片在肿瘤临床治疗研究中的指导作用 目的：运用免疫组化方法检测60份淋巴瘤标本制成的组织芯片中穿孔素、颗粒酶B的表达和分布情况 结果：42份B细胞淋巴瘤的瘤细胞均不表达穿孔素和颗粒酶B。10份外周T细胞淋巴瘤中8份表达穿孔素,9份表达颗粒酶B,阳性表达细胞均为非肿瘤细胞。 结论：穿孔素和颗粒酶B是鉴定活化的细胞毒性细胞的免疫标志物, 可作为 NK/T细胞淋巴瘤的诊断性标志物;5.在临床肿瘤预后判断中的研究 在判断肿瘤预后研究中, 组织芯片在寻找筛选预后判断标志物的过程中起重要作用。 ;三、组织芯片在形态学教学中的应用 组织胚胎学及病理学等形态教学是医学生教学中的基础教学 传统制片方法耗时、 费力、 费资源，制出来的切片, 并不是每张切片上都有典型病变, 这对学生的学习非常不利。;四、组织芯片在检测质量控制中的应用 质量控制是免疫组织化学（IHC）面临的主要难题之一 差异原因：实验室间抗原提取、染色程序、使用的抗体和对染色结果的解释等方面 外部质量保证 内部质量保证 ;用作免疫组织化学内对照的组织芯片的组成;细 胞 芯 片; 细胞芯片;Ziauddin等2001年开发了一种细胞微阵列技术，可对哺乳动物细胞的基因功能进行高能量分析，能快速检测影响细胞表型和细胞内大量编码蛋白质的基因的功能。 方法： 将DNA或cDNA固定在玻片上，随后将玻片置于哺乳动物细胞的培养液中。 细胞附着在玻片上生长，经过2到3次分裂后，产生被转染的细胞组成的微阵列。 因此也称为转染细胞微阵列。;芯片制备：将人胚肾HEK293细胞的cDNA克隆进入已带绿色荧光蛋白（GFP）报告基因的还原病毒质粒载体中，然后把纳升的病毒质粒DNA与凝胶水溶液混匀，用自动点样仪在玻片上点样阵列。干燥后，用类脂转染剂处理DNA斑点 样品：培养在平皿中的人胚肾HEK293细胞 转染：将玻片放在培养液中，细胞在质粒DNA和凝胶斑点上生长，经分裂2或3次后，产生了被转染的细胞 检测：经激光照射，报告基因在被转染的细胞中表达后，可检测到绿色荧光; 预实验;识别参与某些细胞表型的基因产物;为了便于用RNAi技术进行大规模高能量功能基因组学研究，Mousses等开发了高度平行的基于微阵列的分析技术。 将溶于转染基质的siRNA点样于载玻片上 覆盖单层贴壁细胞 孵育以使之反向转染 通过数字化图像分析工具在单细胞水平上评价基因沉默的效果;The RNAi microarray platform; 细胞芯片;细胞免疫芯片; 细胞免疫芯片的原理 将不同的抗原或抗体以较高密度固定在经过修饰的玻片等载体上并保持其活性不变, 形成抗原或抗体微阵列 通过抗原或抗体微阵列和细胞悬液样品的反???捕获待测目的细胞 靶向细胞将结合在微阵列的不同抗体或抗原点上