2019高中生物第4章现代生物技术4.3聚合酶链式反应技术课件北师大版选修1.pptVIP

第3节　聚合酶链式反应技术;1.记住PCR技术的原理。 2.简述PCR技术的基本操作。 3.说出PCR技术的应用。;一;一;一;一;一;一;1.PCR技术与DNA的复制 PCR反应通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。PCR反应的实质就是DNA复制,所以PCR反应与DNA复制的原理相同,计算方法也大体相同。例如:PCR反应中的目的片段一般以2n的方式积累,其中n为反应循环次数。一个DNA片段在30次循环后反应物中大约有10亿个这样的片段。;2.PCR的常见问题 PCR实验很容易出现假阳性(检测出非目的片段的扩增,而未检测出目的片段的扩增)或假阴性(未检测出任何片段的扩增)的结果。 PCR技术高度灵敏,极其微量的靶基因污染都会造成非目标DNA片段的大量扩增,因此模板DNA的污染是PCR出现假阳性结果的主要原因。此外,样品中存在靶基因的类似序列也可能造成假阳性结果。为了避免因污染而造成的假阳性结果,PCR操作时要注意做到隔离操作区,分装试剂,简化操作程序,使用一次性吸头等。;出现假阴性结果的常见原因有Taq DNA聚合酶活力不够或其活性受到抑制;引物设计不合理;提取的模板质量或数量不过关、PCR系统的建立欠妥当及循环次数不够,等等。当实验中出现假阴性的情况时,应首先在原来扩增的产物中再加入Taq DNA聚合酶,并增加5~10次循环。为了防止假阴性结果的出现,在选用Taq DNA聚合酶