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* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 利用细胞融合技术观察蛋白质运动 (二)、膜的不对称性 质膜内外两层的组分和功能的差异,称为膜的不对称性。 样品经冰冻断裂处理后,细胞膜可从脂双层中央断开,各断面命名为:ES,细胞外表面(extrocytoplasmic surface);EF,细胞外小页断面(extrocytoplasmic face);PS,原生质表面(protoplasmic surface);PF,原生质小页断面(protoplasmic face) 。 EF PF 小鼠肝细胞膜冰冻蚀刻 1、膜脂的不对称性:同一种脂分子在脂双层中呈不均匀分布,如:PC和SM主要分布在外小叶,PE和PS分布在内小叶。用磷脂酶处理完整的人类红细胞,80%的PC降解,PE和PS分别只有20%和10%的被降解。 膜脂的不对称性还表现在膜表面具有胆固醇和鞘磷脂等形成的微结构域——脂筏。 2.复合糖的不对称性:糖脂和糖蛋白只分布于细胞膜的外表面。 3、膜蛋白的不对称性:每种膜蛋白分子在细胞膜上都具有特定的方向性和分布的区域性。如各种激素的受体具有极性,细胞色素C位于线粒体内膜M侧。 (三)脂筏lipid raft 是富含胆固醇和鞘磷脂的微结构域(microdomain)。 约70nm左右,是一种动态结构,位于质膜的外小页。 介于无序液体与液晶之间,称为有序液体(Liquid-ordered)。 在低温下这些区域能抵抗非离子去垢剂的抽提,称为抗去垢剂膜(detergent-resistant membranes,DRMs)。 就像一个蛋白质停泊的平台,与膜的信号转导、蛋白质分选均有密切的关系。 Mechanisms of raft clustering. (a) Rafts (red) are small at the plasma membrane, containing only a subset of proteins. (b) Raft size is increased by clustering, leading to a new mixture of molecules. This clustering can be triggered in different way. 三、细胞膜的功能 为细胞的生命活动提供相对稳定的内环境; 选择性的物质运输,包括代谢底物的输入与代谢产物的排出; 提供细胞识别位点,并完成细胞内外信息的跨膜传递; 为多种酶提供结合位点,使酶促反应高效而有序地进行; 介导细胞与细胞、细胞与基质之间的连接; 参与形成具有不同功能的细胞表面特化结构。 第三节 细胞表面的分化 细胞表面的特化结构如:膜骨架、鞭毛和纤毛、微绒毛及细胞的变形足等等,分别与细胞形态的维持、细胞运动、细胞的物质交换等功能有关。 一、细胞外被 动物细胞表面的一层富含糖类物质的结构,称为细胞外被或糖萼。用重金属染料,如钌红染色后,在电镜下可显示厚约10~20nm的结构,边界不甚明确。 作用:保护,细胞通信,并与细胞表面的抗原性有关。 红细胞质膜上的糖鞘脂是AB0血型系统的血型抗原,糖链结构基本相同,只是糖链末端的糖基有所不同。A型血的糖链末端为N-乙酰半乳糖;B型血为半乳糖;O型血则缺少这两种糖基。 Simplified diagram of the cell coat (glycocalyx) 二、膜骨架 膜骨架是质膜下纤维蛋白组成的网架结构;位于细胞质膜下约0.2μm厚的溶胶层。 作用:维持质膜的形状并协助质膜完成多种生理功能。 成熟的哺乳动物血红细胞没有核和内膜系统,是研究膜骨架的理想材料。 红细胞经低渗处理,细胞破裂释放出内容物,留下一个保持原形的空壳,称为血影(ghost)。 经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,血影成分主要有: 血影蛋白:由结构相似的α链、β链组成异二聚体,两个二聚体头与头相接连形成四聚体。 锚蛋白(ankyrin):与血影蛋白和带3蛋白的胞质部相连,将血影蛋白网络连接到质膜上。 带三蛋白:是阴离子载体,通过交换Cl-,使HCO 3 -进入红细胞。为二聚体,每个单体含929个氨基酸,跨膜12次。 血型糖蛋白:单次跨膜糖蛋白,约有131个氨基酸, N端在膜外侧,结合16条寡糖链;C-端在胞质面,链较短,与带4.1蛋白相连。血型糖蛋白与MN血型有关,其功能尚不明确。 红细胞膜骨架的构成: 血影蛋白四聚体游离端与短肌动蛋白纤维(约13~15单体)相连,形成血影蛋白网络。通过两个锚定点固定在质膜下方: 通过带4.1蛋白与血型糖蛋白连结; 通过锚蛋白与带3蛋白相连。 这
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