实验5 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察.ppt

小鼠巨噬细胞吞噬鸡血红细胞现象的观察 一 实验目的 通过对小鼠腹腔巨噬细胞(macrophage, MΦ)吞噬鸡血红细胞（CRBC）活动的观察，加深理解细胞吞噬作用的过程。 了解巨噬细胞在非特异性免疫中的作用 二、实验原理 大吞噬细胞 来源： 单核巨噬细胞 存在部位： 血液（单核细胞) 全身结缔组织及小血管的基底膜组织（巨噬细胞） 功能： 吞噬病原微生物（寄生虫等），死亡细胞。 小吞噬细胞 来源： 中性粒细胞 存在部位： 血液 、 炎症部位（全身） 功能：主要吞噬化脓菌 三、实验用品 材料：清洁级小白鼠。 器材：显微镜、手术剪刀、手术镊子、载玻片。 试剂： 1） 0.85％生理盐水，高压灭菌后使用。置4℃冰箱保存。 2） 3%淀粉，生理盐水配制，高压灭菌后使用。置4℃冰箱保存。 3） 1%鸡红细胞（CRBC）悬液：实验前从鸡翼下静脉抽取血液，按1%浓度放入无菌生理盐水中，混匀后，实验前使用。（新鲜血液，未抗凝，现配现用，不用长时间保存，实验效果好。） 四 实验步骤 1.在实验前2天，给小鼠腹腔注射3％淀粉（溶于生理盐水）。注射部位在腹部中央，持针以45度斜角刺入，注意勿伤及内脏或注入肠内。 2.实验时，给每只注射过淀粉的小白鼠腹腔注射1％鸡红细胞悬液1ml，轻按小白鼠腹部，使悬液分散。 3. 30min后,用颈椎脱臼法处死小鼠。将小鼠腹面朝上，于腹部中央用手拎起皮肤，用剪刀剪一环口，然后用手向上向下撕开腹部皮肤，充分暴露腹膜。此时，可注射着1ml生理盐水，轻揉腹部片刻。随即用剪刀剪一纵形口，并用镊子把两边皮肤拎起来，以防腹腔液流出。把内脏推向一侧，用不装针头的注射器或吸管吸取腹腔液。 4.取一张干净的载玻片，滴一滴腹腔液，制备涂片。另制备鸡血涂片一张，观察鸡血细胞显微形态。涂片制备方法如下。 5.制备好的涂片，空气干燥后，放入配有100%甲醇液的固定缸中固定5-10 min。 6.取出固定后的载片，用Giemsa染色细胞（染色方法同骨髓细胞染色体制备实验，扣染），染色时间为10-15min。 7.取出染色载片，微小水流冲片，擦干后显微观察实验结果。 五、结果 1.鸡红细胞巨噬细胞的形态鉴别：在显微镜下，可见大量细胞核为蓝紫色的鸡红细胞，胞质颜色较淡，调节光亮度，可见细胞大多为圆形或椭圆形细胞，核大多也为圆形，一般位于细胞中位。一其表面具有许多似刺毛状 2.巨噬细胞的形态：显微镜下可见未吞入红细胞的巨噬细胞，细胞巨大，胞核染为红色，胞质几乎不着色，胞质内常可见很多空隙，有大量突起。吞噬红细胞后的巨噬细胞，胞质中含有1个或多个鸡红细胞。 2.可观察MΦ吞噬CRBC的各个过程：可见有的MΦ表面粘附有1～多个CRBC；有的已形成伪足，正在将CRBC吞入；有的MΦ内已吞入1～数个CRBC，各CRBC呈各自完整形态，其数目有时可达到8～15个；有的MΦ将已吞入的CRBC在胞质中刚形成椭圆形的吞噬体；有的MΦ内的吞噬泡体积缩小，并呈圆形，这是已与初级溶解体发生融合，泡内物正在被消化分解。 六、作业 1、绘制在高倍镜下所见的不同吞噬阶段的巨噬细胞图各一个。(如CRBC附于MΦ表面、吞入红细胞、吞入形成吞噬泡和吞噬泡已开始被消化分解等)，示吞噬作用的过程。 2、实验前2天，给小白鼠腹腔注射含淀粉的目的是什么？