第三章 细胞生物学研究方法 课件.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 五、生物芯片技术 生物芯片(biochip)是一门由生物学、微电子学、物理 学、化学和计算机科学等多学科交叉融合而成的高 新技术，主要包括基因芯片和蛋白质芯片。 基因芯片（gene chip）：将大量特定的寡核苷酸片断作 为探针，排列固定于支持物表面，与标记样品进行杂交， 通过检测杂交信号强度，实现对生物样品快速、并行、 高效的检测的一种技术。 基因芯片主要技术流程是：芯片的设计与制备，靶基因的 标记，芯片杂交，杂交信号检测。 退 出 Technology for Cell Biology 首 页 第三章 细胞生物学研究方法 五、生物芯片技术 蛋白质芯片(protein chip)技术：将大量蛋白质 或多肽固化于固相支持物表面，通过蛋白质— 蛋白质间的相互作用(如抗原抗体反应、受体 配体识别等)，对样品中靶蛋白分子进行高通 量检测的一种技术。 退 出 Technology for Cell Biology 首 页 第三章 细胞生物学研究方法 基因芯片主技术流程 退 出 Technology for Cell Biology 首 页 第三章 细胞生物学研究方法 退 出 Technology for Cell Biology 首 页 第三章 细胞生物学研究方法 六、蛋白质组学技术 蛋白质组（proteome）：指在特定时空条件下某种细胞、组织或器官所含有的全部蛋白质。 蛋白质组学（proteomics）：以特定时空条件下某种细胞、组织或器官所含有的全部蛋白质的存在及其活动方式为研究对象的学科。 蛋白质组学研究的基本技术： 双向电泳 质谱 退 出 Technology for Cell Biology 首 页 第三章 细胞生物学研究方法 1.双向电泳 第一向：高压电场下进行等电聚焦（IEF）。 第二向：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。 退 出 Technology for Cell Biology 首 页 第三章 细胞生物学研究方法 六、蛋白质组学技术 2.质谱 原理：样品分子离子化后，根据离子间质荷比（m／z）的差异来分离并确定样品的分子质量。 种类： 电喷雾电离质谱（electrospray ionization mass spectrometry, ESI-MS）。 基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization/time-of-flight, MALDI-TOF-MS）。 退 出 Technology for Cell Biology 首 页 第三章 细胞生物学研究方法 六、蛋白质组学技术 2.质谱 串联质谱(tandem mass spectrometry，MS/MS) ：可测定肽片段的序列结构。 串联质谱测定多肽氨基酸序列 A.串联质谱仪结构 B.肽段在串联质谱中的运动过程 C.肽段断裂位点 退 出 Technology for Cell Biology 首 页 第三章 细胞生物学研究方法 六、蛋白质组学技术 质谱确定蛋白及多肽氨基酸序列 退 出 Technology for Cell Biology 首 页 第三章 细胞生物学研究方法 (一)常规自动化DNA序列测定 最常使用的四色荧光自动化测序，是基于Sanger建立的双脱氧链末端合成终止法的基本原理。 七、高通量测序技术 退 出 Technology for Cell Biology 首 页 第三章 细胞生物学研究方法 (一)常规自动化DNA序列测定 末端序列检测原理 测序结果 七、高通量测序技术 退 出 Technology for Cell Biology 首 页 第三章 细胞生物学研究方法 (二) DNA高通量测序 1.原理 将DNA固定在芯片上，测序反应以大规模阵列形式排列，边合成边测序，不依赖于电泳， 阵列上DNA合成时的单个碱基改变所发出的荧光信号被检测器捕获并转化为一个测序峰值，从而获得序列信息。 退 出 Technology for Cell Biology 首 页 第三章 细胞生物学研究方法 七、高通量测序技术 (二) DNA高通量测序 2.应用 （1）对一个物种或个体的转录组和基因组进行 细致全貌的分析。 （2）与其他基因组水平研究