第二章细胞生物学实验技术课件.ppt

* * 小鼠肾小球切片 蓝色细胞核 红色微丝 绿色凝集素 * * * * 体外培养的MDCK细胞 * * * * * * * 电子束作为光源 波长一般小于0.1nm * * 电子束的穿透能力有限 为了获得较高分辨率 切片厚度一般仅为40-50nm * * * * * * * * * (2) Northern blotting – RNA 细胞中的RNA probe (3) 原位杂交技术（in situ hybridization） 原理 用核苷酸探针对特殊的核苷酸 序列在其原位进行杂交。 荧光原位杂交（FISH） 人类染色体端 粒DNA的荧光 原位杂交照片 外源基因 原核细胞 转化 真核细胞 转染 基因扩增 蛋白质表达 4.基因转移技术—蛋白质大量表达 胰岛素 促红细胞生成素 5.酵母双杂交技术—蛋白质相互作用 6.RNA干扰技术 ——RNAi 第六节 常见模式生物 模式生物：生物学家通过对选定的生物物种进行科学研究，用于揭示某种具有普遍规律的生命现象，此时，这种被选定的生物物种就是模式生物。 特点： 个体较小 容易培养 操作简单 生长繁殖快 大肠杆菌 酵母 秀丽隐杆线虫 Caenorhabditis elegans Drosophila melanogaster 果蝇 斑马鱼 小鼠 拟南芥 * * * * * 图示：普通双筒显微镜。比较高级的显微镜上都设有倾斜式的双目镜筒。在物镜转换器上方装有四个棱镜，使经过物镜的光线平分为两路到达目镜，故双筒显微镜的亮度要比单筒者为暗。双筒显微镜的优点为同时用两眼观察，有较强的立体感。 * * 0.5um=最短的可见光波长 450nm 油镜N=1.5 * * * 2008年10月8日，日本科学家下村修（伍兹霍尔海洋生物学研究所）、美国科学家马丁·查尔菲（哥伦比亚大学）和钱永健（加利福尼亚大学圣迭戈分校）因为发现和改造绿色荧光蛋白而获得了当年（2008）的诺贝尔化学奖。 /view/957211.htm * 20世纪60年代，一位日本科学家从美国西岸打捞了大量发光水母，带回位于华盛顿州的实验室进行研究。这些水母在受到外界的惊扰时会发出绿色的荧光，这位科学家希望找到这种水母的荧光素酶。然而，经过长期的重复努力，居然毫无收获。他大胆地假设，这种学名叫Aequorea victoria的水母能发光也许并不是常规的荧光素/荧光素酶原理。他想，可能存在有另一种能产生荧光的蛋白。此后，他进行了更多的实验，终于搞清楚了这种水母的特殊发光原理。原来，在这种水母的体内有一种叫水母素的物质，在与钙离子结合时会发出蓝光，而这道蓝光未经人所见就已被一种蛋白质吸收，改发绿色的荧光。这种捕获蓝光并发出绿光的蛋白质，就是绿色荧光蛋白。这位日本科学家也因为这项发现，获得了刚刚颁发的诺贝尔化学奖，他就是日本科学家下村修。 然而，绿色荧光蛋白被发现20多年后，才有人将其应用在生物样品标记上。1993年，马丁·沙尔菲成功地通过基因重 组的方法使得除水母以外的其他生物(如大肠杆菌等）也能产生绿色荧光蛋白，这不仅证实了绿色荧光蛋白与活体生物的相容性，还建立了利用绿色荧光蛋白研究基 因表达的基该方法，而许多现代重大疾病都与基因表达的异常有关。至此，生物医学研究的一场“绿色革命”揭开了序幕。 后来，美籍华人钱永健系统地研究了绿色荧光蛋白的工作原理，并对它进行了大刀阔斧的化学改造，不但大大增强了它的发光效率，还发展出了红色、蓝色、黄色荧光蛋白，使得荧光蛋白真正成为了一个琳琅满目的工具箱，供生物学家们选用。目前生物实验室普遍使用的荧光蛋白，大部分是钱永健改造的变种。 * * 采用生物学、化学和物理学结合的方法，发明了一种荧光促进剂，激发诸如叶绿素等植物内部潜在的发光物质，让花朵自然产生荧光。 * * * C.亲和层析 D.疏水性层析 亲和 疏水性 基质＋抗体 基质＋疏水基团 ⑶高压液相层析 ( HPLC） 基质粒度小 分辨率高 分离速度快 4.电泳 — 分析蛋白质、核酸 (1)原理 氨基酸带有正、负电荷