生物化学A上-6酶完整课件.pptx

蛋白质-酶;蛋白质结构与功能;肌红蛋白(Myoglobin);His F8 (His93);蛋白-配体的可逆相互作用;血红蛋白(Hemoglobin);肌红蛋白(Mb)和血红蛋白(Hb)的氧解离曲线; 协同效应(cooperativity) ; 定义：别构效应亦称变构效应，是指一个蛋白质与它的配体结合后，蛋白质的构象发生变化,使它更适合于功能的需要，这一类变化称为别构效应。 别构蛋白（allosteric protein）：是指具有别构效应的蛋白质或酶.如血红蛋白 别构剂： 亦称效应剂,是指凡能触发蛋白质分子发生别构效应的物质。如O2 ; T态转变成R态是逐渐结合氧气完成的，在脱氧Hb中，Fe2+半径比卟啉环中间的孔大，因·此高出卟啉环平面0.075nm,而靠近F8位组氨酸残基。当第一个O2与血红素结合后，使Fe2+的半径变小，进入到卟啉环中间的小孔中，引起F肽段等一系列微小的移动，同时影响附近肽段的构象，造成两个亚基间盐键断裂，使亚基间结合松弛，可促进第二个亚基与O2结合，依此方式可影响第三、四个亚基与O2结合最后四个亚基全处于R态。;HbO2;当nH=1，配体结合没有协同性； 当nH1，配体结合正协同； 当nH1，配体结合负协同； 理论上当nH=n，达到最大值，所有位点结合配体，实际中不存在，所以实际测得的nH总是小于n。; 0 20 40 60 80 100 120;波尔效应的生理意义; BPG(2,3-二磷酸甘油酸）是红细胞中大量存在的糖代谢的中间产物。它能够降低血红蛋白对O2的亲和力，使血红蛋白的氧合曲线右移。1个脱氧血红蛋白分子能够与1分子的BPG结合。;Hemoglobin has lower affinity for O2 than myoglobin Binding of O2 enhances binding of more O2 (cooperative binding). Affinity of hemoglobin for O2 is pH dependent. Binding of H+ and CO2 promote release of bound O2 in muscles. O2 affinity is regulated by organic phosphates. Example: 2,3-bisphosphoglycerate (BPG) lowers affinity for O2. ;蛋白质的理化性质;（一）蛋白质的两性电离 （二）蛋白质的胶体性质 （三）蛋白质的变性、沉淀和凝固 （四）蛋白质的紫外吸收 （五）蛋白质的呈色反应;蛋白质的等电点（pI） ;蛋白质在等电点的溶解度最小;三、蛋白质的变性、沉淀和凝固 ;蛋白质沉淀(protein precipitation) 在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。这一现象被称为蛋白质沉淀。 变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。 蛋白质的凝固作用(protein coagulation) 蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。这种现象称为蛋白质的凝固作用。;蛋白质的分离纯化;;蛋白质的盐析;透析（Dialysis）;蛋白质分离纯化中常用的层析;分子筛层析的工作原理;离子交换层析原理;亲和层析;High pressure limits diffusion and increases interactions with chromatography media HPLC gives very high resolution of protein components;蛋白质分子量的确定方法;蛋白质的电泳 ;几种常用的电泳;聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）;Polyacrylamide is a useful polymer for gel electrophoresis because both the concentration and cross-linking of the gel can be controlled.;基本原理;分类;;实验中各成分作用;标准蛋白分子量;实验注意事项;5. 激活剂的用量适当； 6. 温度的影响：最佳温度为23~25℃ 7. 氧气的影响; 8. 凝胶添加剂; 9. 聚胶时间; 10. 单体的浓度：可选范围为3％~30％； 11. 1.4g SDS/g蛋白质，蛋白质不可过量，否则SDS结合量不足； 12. 标准曲线不能重复使用。;SDS的优点;SDS的缺点;等电聚焦Isoelectric Focusing;Isoe