伤寒VI多糖疫苗.docVIP

伤寒Vi多糖疫苗 Shanghan Vi Duotang Yimiao Vi Polysaccharide Typhoid Vaccine 本品系用伤寒沙门菌培养液纯化的Vi多糖，经用PBS稀释制成。用于预防伤寒。 1基本要求 生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。 2制造 2.1菌种 生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。 2.1.1名称及来源 生产用菌种为伤寒沙门菌Ty2株，CMCC50098。 2.1.2种子批的建立 应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。 2.1.3 主种子批启开后传代次数不得超过5代。工作种子批启开后至接种发酵罐培养传代次数不得超过5代。 2.1.4 2.1.4 菌种接种于pH7.2～7.4的肉汤琼脂、马丁琼脂或其他适宜的培养基35～37℃培养16～20小时，应为无色半透明、边缘整齐、表面光滑湿润的圆形菌落。 2.1.4.2 染色镜检应为革兰阴性杆菌。 2.1.4.3生化 发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇均产酸不产气；不发酵乳糖、蔗糖（附录ⅩⅣ）；氧化酶试验阴性。 2.1.4.4血清学 （1）玻片凝集试验 菌种的新鲜培养物与Vi及H-d参考血清有强凝集反应（+++以上），与O-9参考血清不产生凝集或仅有较弱凝集反应。 （2）定量凝集试验 菌种的新鲜培养物，用PBS制成6.0×108/ml的菌悬液，加入终浓度为0.5%的甲醛溶液，杀菌后的菌液（或直接用活菌菌液），与伤寒Vi参考血清做定量凝集试验；另取经100℃ 30分钟加热杀菌的菌液，与伤寒O参考血清做定量凝集试验。出现（+）凝集之血清最高稀释度为凝集反应效价，凝集效价应不低于参考 2.1.5种子批的保存 种子批应冻干保存于8℃以下； 2.2原液 2.2.1生产用种子 启开工作种子批菌种，培养特性及染色镜检合格后，接种于改良半综合培养基或其他适宜培养基，制备数量适宜的生产用种子。 2.2.2生产用培养基 采用改良半综合培养基或经批准的其他培养基。培养基不应含有与十六烷基三甲基溴化铵能形成沉淀的成分。 2.2.3培养 采用培养罐液体培养。在培养过程中及杀菌前取样进行菌液浓度测定及纯菌试验，涂片做革兰染色镜检，如发现污染杂菌，应废弃。 2.2.4收获及杀菌 培养物于对数生长期的后期或静止期的前期收获。取样进行菌液浓度测定及纯菌检查，合格后在收获的培养液中加入甲醛溶液杀菌，其最终浓度为0.5%～2.0%，杀菌条件以确保杀菌完全又不损伤其多糖抗原为宜。 2.2.5纯化 2.2.5.1去核酸 将已杀菌的培养液（单批或多批混合）离心后收集上清液，加入十六烷基三甲基溴化铵，充分混匀，形成沉淀；离心后的沉淀物用注射用水溶解，并加入适量氯化钠（或氯化钙）溶液，摇动或搅拌1小时，使多糖与十六烷基三甲溴化铵解离；加入乙醇至最终浓度为25%，2～8℃静置1～3小时或过夜，离心收集澄清的上清液。 2.2.5.2沉淀多糖 于上述上清液中加入冷却乙醇至最终浓度为80%，充分振摇使多糖沉淀，离心收集沉淀；沉淀物用无水乙醇及丙酮洗涤各洗2次以上，干燥后即为多糖粗制品。应保存在-20℃ 2.2.5.3多糖纯化 将多糖粗制品溶解于1/10饱和中性醋酸钠溶液中，使其浓度达5～20mg/ml；按1∶2容量用冷酚（100g结晶酚溶于40ml的 1/10饱和醋酸钠溶液）提取数次，离心收集上清液，并用0.1mol/L氯化钙溶液或其他适宜溶液透析，也可用超滤方法；（必要时或有条件时也可用其他方法去除内毒素）；加入乙醇至最终浓度为75%～80%，离心收集的沉淀物用无水乙醇及丙酮洗涤各洗2次以上，干燥后用灭菌注射用水溶解，除菌过滤后即为精制多糖原液。提取过程应尽可能在15℃ 2.2.6原液检定 按3.1项进行。 2.2.7保存及有效期 原液应保存于-20℃ 2.3半成品 2.3.1配制 半成品可由单批或多批多糖原液合并后，用无菌无热原PBS（pH6.5～7.5）稀释原液，可加入适量防腐剂。每1次人用剂量含多糖应不低于30μg。 2.3.2半成品检定 按3.2项进行。 2.4成品 2.4.1分批 应符合“生物制品分批规程”规定。 2.4.2分装 应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。 2.4.3规格 每瓶5ml（10次人用剂量）、1ml（2次人用剂量）、0.5ml（1次人用剂量）；每1次人用剂量0.5ml，含伤寒Vi多糖应不低于30μg。 2.4.4包装 应符合“生物制品包装规程”规定。 3检定 3.1原液检定 3.1.1鉴别试验 采用免疫双扩散法（附录Ⅷ C），Vi多糖与伤寒Vi血清48小时内应形成明显沉淀线，而与伤寒O血清不形成沉淀线。 3.1.2化学检定 3.1.2.1固体总量 依法测定（附录Ⅶ M）。 3.1.2.2蛋白质含量 应